蛋白质磷酸化（Phosphorylation）是指蛋白质在磷酸化激酶的催化下，把ATP或GTP上的磷酸基转移到蛋白质的特定位点（氨基酸残基Ser、Tyr、Thr）上的过程。 磷酸化是一种广泛存在的翻译后修饰类型，细胞内有超过30%的蛋白质发生磷酸化修饰。因此磷酸化修饰是调节和控制蛋白质活力和功能的最基本、最普遍，也是最重要的机制。磷酸化参与各种生理和病理过程，调控细胞的增值、发育、分化、凋亡等生命活动，广泛运用在信号转导通路、细胞凋亡、发育分化、癌症机理等研究领域。

技术原理

蛋白磷酸化修饰是生物体内最为重要、含量最丰富、研究最为深入的修饰方式，很多富集方法首先在磷酸化蛋白组学分析中开发和利用，主要包括：固相金属离子亲和层析（IMAC）、二氧化钛亲和层析（TiO2）、抗体免疫亲和富集、结合二维电泳的染色分离、强阳离子交换色谱、强阴离子交换色谱、反相色谱等。其中，二氧化钛亲和层析（TiO2）和磷酸化motif抗体免疫亲和富集法在正大康健使用较多，两种方法所获得的磷酸化修饰肽段彼此互补，能够最大限度覆盖磷酸化蛋白质组。首先将蛋白样本酶解成肽段混合物，然后使用液相色谱对酶解后的肽段混合物进行组分分离以降低样本复杂程度，然后通过高质量的磷酸化修饰类抗体和生物材料对修饰肽段进行富集，最后上样至液相色谱-串联质谱中进行分析定量。

技术优势

• 高特异性的修饰类泛抗体；

• 高精度精确定量，通量高达10000以上；

• 结果验证：可基于PRM技术对定量结果进行验证；

• 多角度分析：提供磷酸化修饰组+代谢组等多组学联合分析。

应用领域

• 基础医学、临床诊断：生物标志物，疾病机理机制，疾病分型，个性化治疗等；

• 生物医药：药物作用机理，药效评价，药物开发等；

• 农林领域：抗逆胁迫机制，生长发育机制，育种保护研究等；

• 畜牧业：肉类及乳品质研究，致病机理研究等；

• 微生物领域：致病机理，耐药机制，病原体-宿主相互作用研究等；

• 海洋水产：渔业资源，海水养殖，渔业环境与水产品安全等；

• 生物能源、环境科学领域：发酵过程优化，生物燃料生产，环境危定风险评估研究等；

• 食品营养：食品储藏及加工条件优化，食品组分及品质鉴定，功能性食品开发，食品安全监检测等。

样品要求

• 组织类型：动物组织≥100mg、植物组织≥100mg、微生物≥20mg；

• 细胞样品：每样品细胞量 ≥ 1X10⁷

• 蛋白提取物：≥100µg

• 体液：血清/血浆≥200µL、尿液≥1ml、唾液/脑脊液≥1ml、泪液≥1mL、支气管灌洗液≥3ml；

• 外泌体：≥10µL

• FFPE石蜡包埋切片：≥0.3 mm * 0.3 mm

参考文献

[1]. Thingholm TE, Jørgensen TJ, Jensen ON, Larsen MR. Highly selective enrichment of phosphorylated peptides using titanium dioxide. Nat Protoc. 2006;1(4):1929-35.

[2]. Jensen SS, Larsen MR. Evaluation of the impact of some experimental procedures on different phosphopeptide enrichment techniques. Rapid Commun Mass Spectrom. 2007;21(22):3635-45.

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