一、 实验原理:
实时荧光定量 PCR 技术(Real-time PCR)是在常规PCR 技术基础上发展而来的一种核酸定量技术。其基本原理是在常规PCR反应体系中加入荧光基团,通过荧光信号的按比例增加来反应 DNA 量的增加,从而对PCR 产物进行实时监测,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析和检测。相较于常规PCR而言, 实时荧光定量PCR技术不仅实现了对DNA/RNA 模板的定量分析,而且具有灵敏度和特异性高、能实现多重反应、自动化程度高、无污染、实时和准确等特点。目前实时荧光定量PCR 技术正广泛应用于基因表达分析,等位基因分析,CHIP 结果分析,转基因生物检测等领域,成为最为重要的核酸扩增和检测手段之一。实时荧光定量 PCR 技术通常包括绝对荧光定量PCR和相对荧光定量PCR。
二、实验步骤:
1. 总RNA提取
2. 反转录单链cDNA
3. 荧光定量PCR上机读数,3个技术重复,送内参基因。
三、实验结果:
扩增曲线,溶解曲线,Cq值等原始数据,根据原始数据做直方图。
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