RNAi抑制基因表达的原理
Dicer酶将dsRNA切割成19-21bp的双链RNA(siRNA),每个片段的3’端都有2个碱基突出。siRNA双链结合一个核酶复合物从而形成RNA诱导沉默复合物(RNA-induced silencing complex,RISC)。ATP依赖的siRNA解双链激活RISC,激活的RISC通过碱基配对定位到靶标RNA转录本上,并在距离siRNA3’端12个碱基的位置切割靶标RNA,致使靶标基因的表达量降低。
RNAi抑制载体一般表达shRNA,Dicer酶将shRNA切割成siRNA。
抑制表达载体介绍
pLV.I:具有copGFP(GFP的一种变体)荧光标记基因和Puro抗性基因。
pLV.I2:具有copGFP荧光标记基因和BSD抗性基因。
pLV.I3:具有mCherry(RFP的一种变体)荧光标记基因和Puro抗性基因。
pLV.I4:具有mCherry荧光标记基因和BSD抗性基因。
以上抑制表达载体均是第三代慢病毒载体,可用于构建稳定细胞株,具有荧光标记基因和抗性基因,H1启动子驱动shRNA大量表达,进而抑制目的蛋白编码基因、LncRNA和miRNA表达。荧光标记基因便于检测抑制表达载体的转化效率、慢病毒滴度和慢病毒的转染效率。抑制表达质粒构建流程
抑制表达质粒构建服务说明
1、客户提供基因名称和基因编号。
2、HYY提供:
(1)20μg抑制表达质粒,浓度500ng/μL以上,超螺旋率95%以上;
(2)500μL抑制表达质粒的菌液;
(3)抑制表达质粒的测序图谱、酶切鉴定结果和序列;
(4)抑制表达质粒构建报告。
3、实验周期1~2周。
基因抑制质粒价格
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