狗原代肝细胞使用说明书
Cat No：TOPCP0007
产品简介
TopBiotech提供的狗原代肝细胞取自新鲜肝组织，按照标准操作流程分离培养。自主研发的狗原代肝细胞完全培养基（货号：TOPMP0007）能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，同时保证不同批次间细胞质量的稳定。此外，TopBiotech还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测来保证细胞纯度；同时也需要经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其它类型的细菌和病毒。
细胞简介: 肝细胞是肝脏的实质细胞，为组成肝脏的主要细胞，占肝脏体积及数量的80%，属高度分化的细胞。肝细胞内代谢活跃，可合成人体必需的凝血因子、脂肪酸、胆固醇、磷脂等，并贮存糖元、蛋白质、脂类和维生素，以供机体需要。肝细胞为多角形，不同的生理条件下大小有差异，如饥饿时肝细胞体积变大。分离的单个肝细胞的直径最大可达20-30μm，每个肝细胞的表面可分为肝窦(血窦)面、毛细胞胆管面和相邻的肝细胞面。生活状态的肝细胞有一定的弹性，不同的动物和不同的生理状态体积变化较大。
组织来源：狗肝组织
产品规格：1×106/Vial（冻存细胞/干冰运输）或1×106/ T-25 flasks（活细胞运输）
细胞纯度：>90％
细胞活力：98％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
细胞检测：细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
培养信息：贴壁生长，成纤维细胞样
细胞培养基：DMEM、 FBS、Penicillin、Streptomycin、细胞因子等
细胞冻存：液氮冻存（完全培养基+10%DMSO+20%FBS）
我们推荐使用TopBiotech的狗原代肝细胞完全培养基（货号：TOPMP0007）作为体外培养使用的培养基。
运输保存
干冰运输：收到细胞时，若干冰已经完全融化，请立即将细胞复苏培养；若尚留有干冰，请立即将细胞放入液氮中保存待用，请按指定条件贮存细胞，切不可将细胞置于高温环境。
常温运输：取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态；待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。
一、细胞复苏
1. 将水浴锅预热至37℃。
2. 用75％酒精擦拭紫外线照射30min的超净工作台台面。
3. 在超净工作台中按次序摆放消过毒的离心管、吸管、培养瓶等。
4. 迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻，并要不断的摇动，使管中的液体迅速融化，时间控制在1分钟左右。
5. 融解好的细胞迅速放进离心机中，2000r/min 或者600g离心2min。
6. 用4-5ml完全培养基重悬细胞，吹打制成单细胞悬液，细胞浓度以5×105/ml为宜。
7. 将复苏好的细胞悬液分装入培养瓶内，将培养瓶放入37℃和5％CO2的培养箱内，8-24小时后换液继续培养，换液时间由细胞生长情况而定。
二、传代培养
1. 细胞吸除或倒掉原瓶中的旧培养基（以25mL培养瓶为例）。
2. 每瓶加入2mL 的PBS，漂洗一次后倒掉。
3. 每瓶加入1mL消化液（0.25%胰蛋白酶或0.02%EDTA或混合液），轻轻摇动培养瓶，经消化液铺满所有细胞表面，待细胞层略有松动，肉眼可观察到“薄膜”现象时，倒掉消化液，再继续作用2~3分钟，轻轻摇动，细胞层可随残留的消化液呈片状从瓶壁上脱落下来，在显微镜下可发现细胞回缩变圆，细胞间隙增大，此时应立即终止消化。
4. 加入完全培养基5mL，用吸管反复吹打瓶壁上的细胞，吹打时要按顺序进行，以确保所有瓶壁均吹打到，吹打时动作要轻柔，不要用力过大，尽可能不要出现泡沫，以避免细胞的机械损伤。
5. 细胞用计数板计数，计算细胞的浓度，并用培养基调整适当的细胞浓度后再分瓶培养。
三、细胞冻存
1. 配制含10%DMSO、10～20%小牛血清的冻存培养液；
2. 取对数生长期的细胞，去除旧培养液，用PBS清洗。
3. 去除PBS，加入适量胰蛋白酶（覆盖培养皿表面）把单层生长的细胞消化下来；
4. 消化完成后加入完全培养基终止消化，收集细胞悬液1000rpm离心5min；
5. 去除上清，加入适量冻存培养液后轻轻吹打使细胞均匀，计数并调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml～1×107/ml；
6. 将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5 ml，在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者；
7. 冻存：标准的冻存程序为降温速率-1～-2℃/ min；当温度达-25℃以下时，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中过夜，最后取出冻存管，移入液氮容器内。
四、 注意事项
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2. 在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。
3. 传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4. 建议客户收到细胞后每天拍照记录细胞生长状态，便于和技术部沟通；由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，详尽告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。
备注：该细胞只可用于科研，由于实验所用试剂、 操作环境及操作手法的不同， 以上方法仅供各实验室参考。
原代狗肝细胞价格
原代狗肝细胞信息由深圳市拓普生物科技有限公司为您提供，如您想了解更多关于原代狗肝细胞报价、型号、参数等信息，欢迎来电或留言咨询。
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