一、技术简介

细胞克隆形成实验是用来检测细胞增殖能力、侵袭性、对杀伤因素敏感性等的重要技术方法。实验方法包括平板克隆形

成实验和软琼脂克隆形成实验。由于细胞生物学性状不同，细胞克隆形成率差别也很大，正常细胞克隆形成率弱，肿瘤

细胞强；初代培养细胞克隆形成率弱，传代细胞系强；二倍体细胞克隆形成率弱，转化细胞系强。由于克隆形成率与接

密度有一定关系，做克隆形成率测定时，接种细胞一定要分散成单细胞悬液，随时检查，到细胞形成克隆时终止培养。

当单个细胞在体外增殖6代以上，其后代所组成的细胞群体，成为集落或克隆。每个克隆含有50以上的细胞，大小在0.3

-1.0 mm之间。集落形成率表示细胞的独立生存能力。各种理化因素可能导致细胞的克隆形成能力发生改变。通过一定

的实验方法可以对细胞的克隆形成能力进行检测，细胞克隆形成率即细胞接种存活率，表示接种细胞后贴壁的细胞成活

并形成克隆的数量。贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆，而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。

克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。

二、实验流程

A．平板克隆形成实验：适用于贴壁生长的细胞。

1. 取对数生长期的各组细胞，制备细胞悬液。

2. 将细胞悬液作梯度倍数稀释，分别接种含培养液的皿中，培养2-3周。

3. 经常观察，当培养皿中出现肉眼可见的克隆时，终止培养。

4. 弃去上清液，4%多聚甲醛固定，GIMSA染色液染10-30 min。

5. 计算克隆形成率，克隆形成率 =（克隆数/接种细胞数）× 100%。

6. 结果统计分析。

B．软琼脂克隆形成实验：适用于非锚着依赖性生长的细胞。

1. 制备细胞悬液，梯度倍数稀释。

2. 分别制备1.2%和0.7%琼脂糖溶液。

3. 下层琼脂凝固后放入37℃培养箱备用。

4. 加入细胞悬液，待上层琼脂凝固后，培养10-14天。

5. 计算克隆形成率，克隆形成率 =（克隆数/接种细胞数）× 100%。

6. 结果统计分析。

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