GST pull down原理
先将体外表达的GST融合蛋白结合到谷胱甘肽Beads上,再将靶蛋白-GST-Beads和细胞裂解液孵育,这样互作蛋白便
一起吸附在Beads上。洗涤掉未结合的蛋白后,再用洗脱液将互作蛋白复合物从Beads洗脱下来,即GST pulldown产
物。这种互作复合物既可以用WesternBlot检测已知蛋白,也可以用质谱鉴定出未知蛋白。
GST pull down实验流程
GST pull down应用
筛选或验证和靶蛋白的互作蛋白。
GST pull-down 与 Co-IP 区别:
GST pull-down 是原核纯化蛋白与真核蛋白在试管内发生生化反应互作的结果,只要互作蛋白间具有相互结合的结
构域基础即可实验证明;
Co-IP 实验是细胞内高表达目的蛋白,并通过 IgG 球珠-抗体-蛋白复合物体系,分离出互作的蛋白复合物,是细胞
内的体内反应结合。
1、GST pull-down 实验优点
1)可验证蛋白质-蛋白质之间的直接互作。
2)GSH 谷胱甘肽偶联球珠亲和力强,洗脱纯度高。
2、GST pull-down 实验缺点
1) 验证互作是在试管中进行的生化反应,不能够完全反应细胞内蛋白真实互作状态。
2)融合表达的 GST 标签,肽链较长,可能会改变原目的蛋白的原有的折叠结构。
GST pulldown价格
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