AAV/Lentivirus介导基因过表达及RNA干扰

一、原理及应用介绍

     基因过表达是将目的基因的编码区克隆到相应的工具病毒载体上，导入细胞使基因实现大量转录和翻译，从而实现目的基因的过表达。此外，还可选择报告基因进行目的基因表达的追踪。

     RNA干扰 (RNA interference, RNAi)技术通过将与内源mRNA同源的小片段（19-23 bp）外源双链 RNA（siRNA）导入细胞中，引发细胞中相应mRNA高效特异性降解，从而导致特定基因表达沉默或下调（knock down）。

基因过表达应用实例（Belbellaa B et al.,Mol Ther Methods Clin Dev,2020.）

     5周龄时MCK小鼠静脉注射AAV Rh.10-CAG-hFXN-HA载体治疗，并于12周龄处死取材切片行心脏组织学观察，高表达组AAV注射量是5×10¹³vg/kg，hFXN-HA的表达量是10,927ng/mg，低表达组AAV注射量是2.5×10¹³vg/kg，hFXN-HA的表达量是695ng/mg，5周龄时注射NaCl的12周龄野生型小鼠以及9周龄MCK小鼠均作为对照组。结果表明高表达组心脏切片中hFXN-HA表达最强的区域但SDH酶活受损。低表达组中没发现类似现象。

AAV介导RNA干扰应用实例

     大鼠海马脑室注射1μg海人酸（KA）造癫痫模型，并注射AAV-Hsp70 shRNA及对照，24小时后从海马组织提取蛋白做western blot检测Hsp70蛋白表达水平，以验证体内干扰效果。20天后进一步计算抽搐评分比较对癫痫发作行为的影响。结果表明AAV-Hsp70 shRNA干扰效果良好，显著下调海马中Hsp70蛋白表达，并减少癫痫发作。

图2.海马Hsp70蛋白表达及大鼠抽搐评分（Hu F,et al.,Cell Reports,2019）

二、我司提供AAV/Lentivirus介导基因过表达及RNA干扰服务

基因过表达

服务流程

1：过表达载体构建（包含基因合成）；

2：rAAV/慢病毒过表达病毒包装与纯化；

3：滴度检测。

需客户提供内容/材料

1：目的基因模板（质粒/菌液）或基因序列（基因ID）；

2：病毒类型选择以及要求；

3：血清型选择。

最终交付

1：载体构建报告；

2：合同约定的rAAV/慢病毒的滴度和病毒量；

3：质检报告；

4：测序文件；

5：过表达质粒/病毒/稳定细胞系。

RNA干扰

服务流程

1：设计三条干扰序列或客户提供干扰序列；

2：干扰载体构建以及筛选检测；

3：rAAV/慢病毒干扰病毒包装与纯化；

4：滴度检测。

注：干扰基因本底表达过低时，过表达筛选保证3条里面有1条干扰效率达到70%以上。

需客户提供内容/材料

1：干扰的目的基因序列（基因ID）或干扰序列/载体；

2：病毒类型选择以及要求；

3：血清型选择。

最终交付

1：载体构建报告；

2：合同约定的rAAV/慢病毒的滴度和病毒量；

3：质检报告；

4：测序文件；

5：干扰质粒/病毒/稳定细胞系。

AAV/Lentivirus介导基因过表达及RNA干扰价格

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