高效液相色谱法(HPLC)实验原理

高效液相色谱(HighPerformance Liquid Chromatography，HPLC)是药物分析最重要的仪器之一。它可以用于药物纯度检测、已知样品的定量分析、混合物的分离等。在药物处方前研究中，多采用HPLC进行样品纯度检测、稳定性测试和溶解度测试，是药物处方前研究重要的分析手段之一。

高效液相色谱仪(HPLC)用液体为流动相的色谱分离分析方法。它在经典色谱理论的基础上，采用了高压泵、化学键合固定相高效分离柱、高灵敏专用检测器等新实验技术建立的一种液相色谱分析法。高效液相色谱仪(HPLC)适于溶解后能制成溶液的样品，不受样品挥发性和热稳定性的限制，对分子量大、难气化、热稳定性差的生化样品及高分子和离子型样品均可检测。用途广泛，占有机物的80%。
 

高效液相色谱(HPLC)优点

1、高压：液相色谱以液体作为流动相(称为载液)，液体流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速地通过色谱柱，必须对载液施加高压。在现代液体色谱中供液压力和进样压力都很高，一般可达到15～30MPa，甚至可达MPa。

2、高速：高效液相色谱的流速较之经典液体色谱快得多，一般可达l—10mL/min， 个别可高达100mL/min以上，这已近似于气相色谱的流速。 高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多，一般少于1h 。

3、高效：气相色谱的分离效能很高，高效液相色谱的柱效则更高，一般约可达 60000理论塔板/米;近来研究出许多新型固定相，使分离效率大大提高。

4、高灵敏度：紫外检测器的最小检测量可达毫微克数量级(10-9 g);荧光检测器的灵敏度可达10-11g。高效液相色谱的高灵敏度还表现在所需试样很少;微升数量级的样品就足以进行全分析。
 

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