普赛生物独有的、“从基因到互作”的IP-MS整体技术解决方案(技术视频),可轻松实现对细胞质、细胞核定位蛋白的互作/后修饰筛选,已助力多个研究团队发表了相应的原创研究论文,促进了文章档次的提升(详见文章比较)。然而,对于膜蛋白,由于其结构和功能的特殊性,对它们的功能和分子机理(蛋白质互作/后修饰)研究一直是行业的难点。 普赛生物通过技术研发,优化了我们的IP-MS整体技术流程,实现了对细胞膜定位蛋白的互作网络的筛选,实验结果如下:Bait蛋白是一个跨膜蛋白,利用基因克隆和慢病毒策略,我们构建了bait过表达细胞株(OE,融合了FLAG标签),同时做了对照组(NC)稳定细胞株。- 由图A的IP结合Western blot (WB)实验结果可见:(1)有糖基化形式(glycosylation)的bait蛋白,证明蛋白质定位于胞膜上,暴露在膜外的部分发生了不同程度的糖基化修饰。(2)bait能被IP有效富集。(3)PC(positive control)是一个细胞质定位的蛋白,WB显示只有明显的一个条带,没有糖基化后修饰。
- 图B,利用IP纯化质谱级别的bait蛋白互作复合物,SDS-PAGE分离及考马斯亮蓝染色。OE组与NC组相比,有明显的差异条带(红色*标注),证明质谱级别的IP成功。
- 将相应的条带切下,进行了LC-MS分析,共鉴定到约1000个蛋白。我们通过对数据深度分析,筛选了约70个潜在的、“非常有生物学意义”bait互作蛋白,以提高后续客户自行IP-WB验证的阳性成功率。
上海普赛生物科技生物有限公司专注于高技术含量的整体解决方案的开发和推广,我们拥有:- 国内最全面的SILAC培养基及相关产品,同时具备多样化的、基于SILAC的技术的整体服务,详见SILAC-全覆盖式产品与服务。
- IP-MS:从“基因”到“蛋白质互作”的整体技术解决方案(技术视频)。
- SILAC+IP-MS:“从基因”到“蛋白质互作”的定量技术解决方案(技术视频)。
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- SILAC+lncRNA pull-down:“从基因到互作”的定量技术解决方案(技术视频)。
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