石蜡切片(paraffin section)是组织学常规制片技术中应用最为广泛的。石蜡切片不仅用于观察正常细 胞组织的形态结构,也,是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要载体,而
且也已广泛交叉应用于其他学科中。石蜡包埋
1.取材固定:离体的组织不及时固定,组织就会自溶,抗原就会扩散。固定就是加入一些可以让蛋白质变性的物质(比如说甲醛),使得蛋白质的结构被固定住,不再发生变化,同时也不会再发生一些活性反应,这样才好做后续的染色步骤。根据不同目的、组织特征代表性取材。取的材料应该小而薄。便于固定剂迅速渗入内部,一般厚度不超过2mm,大小不超过5×5mm㎡。每个组织最好多切几块。新鲜组织固定(组织块不宜太大太厚,这样固定液很难进入里面,可能会导致在较短的时间内脱水不完全,引起一系列的问题,比如浸蜡不彻底,切片不好完成,切不完整。导致后来切片染色的脱落,造成染色的失败。组织块也不能太小,否则不能保证切片数量,且透明时间和浸蜡时间不能很好的把握。)固定时间因固定剂种类而异,大多6-12小时,一般不超过12小时。视组织固定的难易程度而定。后续如果做免疫组化,不应超过12小时;后续如果做HE染色,不应超过24小时。固定完之后用水洗(目的:洗去渗入组织的固定液,终止固定以免影响对组织的内结构的观察,分析。换液两次,一次半小时。)之后可直接脱水包埋或放入75%的乙醇4度可长期保存。
2.脱水:从75%的乙醇中取出,分别放到80%,90%,100%(I)的乙醇中半小时,再放入100%乙醇中15min。固定完直接水洗包埋的,应从70%乙醇开始,易碎组织从50%乙醇开始。组织脱水时间不应过长,尤其是高浓度乙醇,要特别注意控制时间。
3.透明:透明的目的是置换组织内的脱水剂,为下一步浸蜡起到桥梁作用,二甲苯可以去除脂肪。乙醇+二甲苯(1:1)2h;二甲苯(I),二甲苯(Ⅱ)各10min(根据组织的大小和透明的难易程度不同,透明的时间可以根据具体情况调整。颜色浅的组织表面油亮,可以透过光时效果较好,颜色较深的组织至少边缘可以透光。类似于风干的杏肉。)
4.浸蜡:浸蜡目的是置换组织中的透明剂,为包埋作准备。二甲苯+石蜡(1:1)
2h;石蜡(I)1h;石蜡(IⅡ)2h.(浸蜡的时间也可以长一些)
5.包埋:在冰盒上进行,将融好的纯蜡(最好提前4小时以上开始融蜡,新蜡更难融)倒入蜡盒(可以浸没组织就行,大约蜡盒的三分之一)由于蜡盒底部与冰盒接触,底部的蜡会先凝固,这样就可以把组织用镊子夹住立在底部。然后继续将蜡盒倒满,便于切片机夹住蜡块。待蜡块完全凝固,包埋就完成了。石蜡切片:包埋好的蜡块用刀片修成规整的四棱台,以少许热蜡液将其底部迅速贴附于小木块上,夹在转轮式切片机的蜡块钳内,使蜡块切面与切片刀刃平行,旋紧。切片刀的锐利与否、蜡块硬度是否适当都直接影响切片质量,可用热水或冷水等方法适当改变蜡块硬度。通常切片厚度为4~7微米,切出一片接一片的蜡带。
展片:在冷水中将蜡带分成单个,并在热水中展平
贴片和烤片:使用载玻片把在热水中的蜡片捞起,并使用恒温箱烘干。
组织芯片Tissue microarrays(TMAs)已经是癌症研究和新药研发的重要工具之一,也是常规石蜡切片技术
的延伸,它通过将许多不同个体组织标本以规则阵列方式排布于同一载玻片上,进行同一指标的原位组织学研
究服务内容 |
服务项目 | 样本类型 | 服务周期 |
组织石蜡制备 | 固定后的组织或新鲜组织 | 2~3个工作日 |
石蜡切片制备 | 组织石蜡 | 1~2个工作日 |
冰冻切片制备 | 固定后的组织或新鲜组织 | 4~5个工作日 |
受体蜡块 | / | 具体详询 |
武汉百杰康生物科技有限公司
可提供有以下产品和技术服务一.现货产品重组蛋白(人、大鼠、小鼠等)7000多种,抗体(单抗、多抗)6000种,以及15000种人源ORF及其他物种ORF二.动物模型、动物实验服务三.组织石蜡芯片服务四.组织染色服务五.常规病理检测服务- 免疫组织化学服务
- 免疫组织/细胞荧光(IF)实验
- 蛋白活性检测
- 免疫印迹(WB)实验
- 免疫沉淀(IP)实验
六.多克隆抗体定制服务
1.2000兔笼位
2.羊、豚鼠等动物服务七.单克隆抗体定制服务
1.交付抗体及细胞株
2.交付抗体基因及重组抗体八.噬菌体展示技术服务
1.人/兔抗体库筛选服务
2.重组抗体的大量表达九.分子生物学实验服务- 载体构建
- RACE实验
- 实时荧光定量服务
- 重组蛋白\抗体定制服务
- 293(或者CHO)大量表达蛋白\抗体服务
十.细胞生物学实验服务- 稳定细胞株的构建
- 耐药细胞株的构建
- 原代细胞分离与培养
- 细胞划痕实验
- Transwell实验
- 流式细胞检测(细胞蛋白表达鉴定、细胞凋亡检测、细胞周期 检测、免疫细胞分群分析)
- 细胞活力检测(MTT,CCK-8,CellTiter-Glo)
- MACS细胞分选
- 细胞免疫学检测分析(细胞吞噬、内吞检测,混合淋巴反应,抗体依赖的细胞介导的细胞毒性(ADCC)检测,抗体介导的细胞毒性(CDC)检测,T细胞的激活或抑制实验,细胞因子分泌检测,红细胞凝集)
- 外泌体的摄取
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