皮肤损伤 | 皮肤烧伤模型 | 大/小鼠 |
皮肤烫伤模型 | 大/小鼠 |
外力损伤模型 | 大/小鼠 |
皮肤烧伤模型(1)复制方法 去除实验兔两后肢内侧大腿被毛约6cm×8cm区域,在该部位两侧安置铜制电极板(3cm×3cm)并固定,右侧为进口,左侧为出口。在非麻醉状态下实施电击,电击时间为5s,额定电压10kV,实际通过电流为(2±0.15)A,皮肤电阻为2500Ω,电击后迅速解除电极板。
(2)模型特点 外观检查:在解除电极板后,局部皮肤与周围未接触面比较:较坚硬且界线清楚。外围为黑色的狭窄环,略高于边缘,并有1~2锄碳化中心,近中心处为灰白坚韧的坏死皮肤,稍呈凹陷。切开皮肤,触摸肌肉略肿胀,色泽不均匀,呈灰红相间,组织疏松、易撕裂、缺乏弹性。该层可见小血管栓塞,深层肌肉略呈暗红色,局部可见凝血。肌肉受损范围尚不清楚。伤后4~28h,外表皮肤烧伤区界线更趋明显;整个创面呈灰白色,但渗出不明显;局部肿胀加剧,质地坚硬形似皮革。较大血管出现继发性的栓塞或凝血。组织坏死波及范围渐扩大,出现整柬肌肉损坏,尤其是深部组织坏死逐步形成。正常肌纤维、间生态组织、片状肌肉凝固性坏死交叉并存。伤后5~7d,皮肤溃破、肌肉翻裂,局部肿胀渐减轻,创面恶臭,感染严重,并有脓液流出,炎性浸润累及原正常区域。创面变成暗灰或出现暗红色的出血斑点,皮肤潮解,烧伤组织的剥脱程度加重。深部组织发生糜烂,可见明显的血管栓塞现象。神经、肌腱等均暴露。而正常兔皮肤光泽滑润,肌束排列规则,色泽均匀,血管走向清晰可见。
光镜检查见:电烧伤早期皮肤呈玻璃样变,皮下有凝固性坏死,问质充血,水肿,肌纤维结构模糊,肌丝融合成团块状或空泡状。伤后24~48h时,真皮浅表有广泛性化脓性坏死。深部组织呈均质样变,内有炎性细胞浸润。血管充血明显,大部分小动、静脉有出血,近病变处的肌纤维大部分凝固溶解,肌内有明显淤血、充血,并有神经变性。伤后3~5d,表皮坏死溃疡形成,真皮下大量化脓,血管壁有血栓形成,部分动脉有坏死,间质充血、出血,部分神经索崩解。肌纤维有灶性瘢痕,部分溶解,中央区有大片坏死,个别有脂肪变、空泡变。7d后可见大量肉芽组织修复明显。正常切片所见:皮肤结构完整,肌纤维排列整齐,细胞核正常,未见血管充血现象。
(3)比较医学 尽管热力烧伤也发生进行性坏死,但用热力损伤的理论和实践难以解释电损伤组织进行性和夹心样坏死等一些临床常见的现象。临床实践中所见绝大部分为1万V以上的电烧伤,实验中避免了有电弧引起的烧伤,使电击后局部损伤的性质为电接触烧伤,而不是电弧烧伤,并使其基本接近于日常系统线路上操作时不慎引起的电烧伤。电烧伤后局部创面的烧伤情况和临床所见高压电烧伤基本相同,创面的发展情况也相似。这说明使用该高压电放电装置实施动物实验,可基本反映临床电烧伤的情况。
烧伤烫伤(TI)小鼠模型
模式动物品系:SPF级Balb/C小鼠,健康,雄性,4~6W,体重为18g~20g。
实验分组:实验分六组:正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组。
实验周期:4-6 weeks
建模方法:
1. 烧伤造模过程:
戊巴Bi妥钠麻醉小鼠后,用剃毛器剃去小鼠背部毛,并使用硫H钠于背部进行脱毛处理至无毛。将小鼠四肢和尾部固定于超净台上,间隔排列,将水浸湿的带控制烧伤面积的纸片放在小鼠背部(2.0cm×3.5cm=7.0 cm2,占体表面积10%),用滴管滴加乙醇,浸满皮肤,打火机点燃,启动秒表计时,到时用湿布熄火,将小鼠放回鼠笼。需进行预实验确定合适的烧伤时间。
2. 烧伤后护理:
烧伤后当天,各组小鼠腹腔注射葡萄糖盐水0.3-0.4 mL,第2天灌胃牛奶0.2-0.3 mL。第3天,正常小鼠与烧伤小鼠各取1只处死,取材。治疗方式为:A、B组于伤口处涂抹药物,C组于伤口处均匀喷上喷剂。烧伤后7天内每天早晚各给药一次,厚度为1mm;第8天起每天给药一次。
3.取材:
于烧伤后2、7、14、30、45、60天分别处死A、B组各1只小鼠。处死小鼠之前,记录小鼠体重和创面的变化(拍大体照,尽可能每只鼠拍照的角度一致)。
取材:老鼠麻醉后摘眼球取血,提血清,置于-80度保存。烧伤创面分2份,一份置于福尔马林保存用于后期病理染色,另一份置于液氮快速冷冻置于-80度保存。
模型评价:
皮肤观察:
观察伤处愈合情况,记录小鼠体重变化、创面愈合时间、感染情况、愈合后瘢痕情况,创面愈合率等,拍大体照,尽可能每只鼠拍照的角度一致。
组织病理学:
HE染色:对皮肤进行病理检查和观察:将烧伤创面连同周边皮肤约0.5 cm取下,平铺于滤纸上,然后固定于10% 福尔马林内,纵向和横向切取宽约3-4 mm皮肤,按常规制备石蜡切片,切片厚度为5 μm,苏木素一伊红(HE)染色,用显微镜观察并照相。
IHC染色:取石蜡切片,进行Ki67染色。