原型物种：人

来源：链脲佐菌素（STZ）导致糖尿病，并诱导视网膜病变

模式动物品系：SPF 级SD大鼠，雄性，8 周

实验分组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组

实验周期：8~10 weeks

建模方法：
适应性饲养1周后进行建模。糖尿病组建模前禁食16h，称重空腹体重，尾静脉取血测定血糖浓度，一次性腹腔注射链脲佐菌素STZ（65mg/kg），72h、96h、120h后应用稳步血糖测定仪检测随机血糖，测定体重，观察一般情况如体型及毛发颜色变化。每组取尾静脉血测量血糖，连续3次血糖≥16.7mmol/L，并出现典型的“三多一少”症状者，即可确定为糖尿病小鼠。

健康对照组将STZ改为等体积生理盐水，其它步骤相同。

取材：造模后6周处死，取左眼及右眼视网膜。

制备视网膜消化铺片：大鼠麻醉后断头处死，取眼球，4%多聚Jia醛固定24~48h，自睫状体后部近锯齿缘剪开巩膜，去掉眼晶状体和玻璃体，将眼后段平均分成3份， 在水中轻轻漂取视网膜；清水漂洗2~3h。将视网膜放人用3%胰蛋白酶消化溶液中，在37°C恒温箱中孵育2~3h，将视网膜轻轻移人蒸馏水中，轻轻吹打，使残余的视网膜神经成分及内界膜完全脱去，剩下一层透明的视网膜血管网，移到载坡片上尽量铺平，自然干燥。
 

模型评价：
1.视网膜血管染色
将模型小鼠与对照组健康小鼠颈椎脱臼处死，迅速摘取眼球，眼球置于PBS中小心、快速地将视网膜分离出来，以视乳头为中心做个放射状切开，将视网膜平铺铺片，进行ADP酶血管染色。

对照组视网膜血管自视盘发出，向四周呈放射状均匀分布，管径较粗，分支良好，能分辨出深浅两层血管网。

模型组视网膜中央血管见无灌注区，血管减少，毛细血管丧失。



组织病理学
1.视网膜HE染色
将模型小鼠与对照组健康小鼠颈椎脱臼处死，迅速摘取眼球，4%多聚Jia醛固定。完成固定后，流水冲洗，于距齿缘后0.5mm处剪开眼球壁，小心地去除角膜、眼前节和玻璃体，切取视网膜组织，制备石蜡切片；进行HE染色。
 

2.视网膜消化铺片的免疫组织化学检测；

在制备视网膜铺片后，进行IHC检测。
 

3.QPCR检测：PI3K、Akt-1 mRNA水平
 

4.WB定性检测：PTEN、BAD；