免疫组化(IHC)： 是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry，IHC)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry，ICC)。
免疫组化（IHC）主要步骤:
1.洗载玻片: 将载玻片置于重铬.酸.钾和浓.H.2.S.O.4.混合液中,目的是为了是载玻片上的硅胶等除去,同时使一些肉眼看不见的凹凸不平的表面变平整,便于组织吸附,然后置于清水中清洗,除去残余的重铬.酸.钾和浓.H.2.S.O.4(大约冲一个小时左右),再将载玻片浸泡于酒精之中, 然后放到架子上,置于37°C温箱中，将多聚赖氨酸涂布于玻片的表面，由于Lys带正电，而大多数的组织带负电荷，从而产生吸附作用。
2.包埋组织: 先在铁模具中加入一些液态石蜡，先稍微冷却，然后再将待包埋的组织置于石蜡之中，并排列整齐，再将塑料模具盒盖上，最后加入少许液体石蜡，进行冷冻，使石蜡变成固态。
3.切片：将包埋好的组织从模具上取下来，并置于石蜡切片机上，切片机通过调节上下左右来来使组织和切割方向一致，然后调节切片的厚度，一般为5µm,如果比较难切，则可以适当调整厚度，用毛笔将切割的载玻片向外拉，并用小镊子将包含有完整组织的载玻片置于40°C温水中。
4.捞组织：当组织载玻片置于40°C温水中之前，要先将水浴中的气泡赶走，以免气泡受热上浮而贴到组织上，组织受热展开，最好是组织不起皱纹，用载玻片捞组织时，一般取载玻片的下1/3或者下1/2一般每种组织捞5-6张，其中2-3张是备用的，每张载玻片上通常捞两份组织，做对照使用，这样形成的误差就比较小了，而且捞载玻片的时候最好方向一致，以便观察，再将捞出来的载玻片置于架子上，放入37°C温箱中烘干。
5.脱蜡：依次将载玻片放入二甲苯-二甲苯-100%酒精-100%酒精-95%酒精-90%酒精-80%酒精-70%酒精，起脱蜡作用的主要是二甲苯,依据的是相似相溶的原理.一般在每个试剂中放10min,天气热可以少放几分钟,相反,天气较冷的话,就要适当延长脱蜡时间,一般为12-15min.
6.抗原修复：脱蜡后在清水中冲洗一段时间，加入3%H2O2浸泡10min，从而除去内源性的过氧化氢酶，然后倒掉H2O2，在清水中洗两次，再加入柠檬酸缓冲液，放入微波炉中蒸煮3min（中火），一般刚到沸腾即可，冷却至室温，然后再蒸煮一次，冷却至室温，蒸煮的目的是为了使抗原的位点暴露出来。
7.血清封闭：冷却至室温后，将柠檬酸缓冲液倒掉，水洗2次，并将载玻片置于PBS中5min，洗2次，擦干组织周围的PBS液，马上加上血清，使一些非特异性的位点封闭起来，然后放入37°C温箱中半小时。血清稀释10倍（900µlPBS：100µl血清封闭液）。
8.加一抗：将温箱中的载玻片取出，用吸水纸擦干载玻片反面和正面组织周围的血清，加一抗，如果做对照实验，就在对照的组织上加PBS。加完一抗后于4°C冰箱中保存过夜。
9.加二抗：将载玻片从冰箱中取出，放入PBS中洗3次，每次5min，擦干组织周围的PBS后加上二抗,然后置于37°C温箱中半小时。
10.加SABC: 将片子从温箱中取出, 放入PBS中洗3次，每次5min，擦干组织周围的PBS后加上SABC, 然后置于37°C温箱中半小时。SABC稀释100倍（990µlPBS：10µlSABC）。
11.加显色剂: 将片子从温箱中取出, 放入PBS中洗3次，每次5min，擦干组织周围的PBS后加上显色剂。（显色剂的配置：在1ml水中加1滴显色剂A，摇匀，然后加1滴显色剂B，摇匀，再加1滴显色剂C，摇匀） A：DAB B：H2O2 C：磷酸缓冲液
12.复染: 将显色后的片子用清水冲洗一段时间后，浸泡于苏木.精中染色，一般动物组织为半分钟，植物组织3-5min。
13.脱水：将复染后的片子置于水中冲洗后，依次将载玻片放入70%酒精-80%酒精-90%酒精-95%酒精-100%酒精-100%酒精-二甲苯-二甲苯。每个试剂中放置2min，最后浸泡在二甲苯中，搬到通风柜中。
14.封片：用中性树胶滴在组织旁边，再用盖玻片盖上，要先放平一侧，然后轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好片子后置于通风柜中晾干。#p#分页标题#e#
免疫组化的相关试剂：最重要的是选择好一抗、二抗或者还有三抗，注意抗体的特异性、效价和交叉反应。
其他常用试剂有：
1、0.01M(pH7.4)的磷酸盐缓冲生理盐水（PBS），稀释抗体和洗片子用；
2、清洁液、纯水，洗玻片用
3、多聚赖氨酸处理载玻片，防止脱片
4、固定液：4%多.聚.甲.醛或冷丙.酮等；
5、15%~30%蔗糖，组织脱水用；
6、梯度酒精脱水、二甲苯透明、石蜡包埋，或者OCT包埋做冰冻切片；
7、抗原修复液：枸橼酸缓冲液（pH6.0）；
8、活化剂：EDTA或者Triton X-100；
9、1%~10%牛血清清蛋白（BSA）封闭液；
10、H2O2，灭活内源性过氧化物酶；
11、显色液：根据你做的酶来选择，如果是HRP就用DAB，如果是AKP，就用NBT/BCIP，免疫荧光则不需要；
12、50%缓冲甘油封片液。
IHC样片参考：
CC1
CCIC
CD3
CD31
CD34
G3
KI67
TNF-1α
VEGFR
晶莱生物服务流程
晶莱生物实验服务项目
| 动物实验 | 细胞生物学 | 病理实验 |
| 消化系统模型 | 细胞培养 | 病理染色 |
| 胃酸分泌模型 | 普通细胞株 | HE染色 |
| 脓毒症模型 | 细胞缺氧培养 | 油红O染色 |
| 胃溃疡模型 | 细胞培养+支架 | 番红固绿染色 |
| 胰腺炎模型 | 干细胞培养 | Masson染色 |
| 肝纤维化模型 | 原代细胞分离/提取/培养 | 天狼猩红染色 |
| DIO肥胖模型 | 细胞转染/病毒感染 | PAS糖原染色 |
| 胆结石模型 | Trans well共培养 | 阿利新蓝染色 |
| 结肠炎(UC)模型 | 细胞增殖 | 甲苯胺蓝染色 |
| 脂肪肝模型 | 细胞计数 | 尼氏染色 |
| 急性肝损伤模型 | 生长曲线测定 | LFB髓鞘染色 |
| 免疫、代谢系统疾病模型 | 存活曲线测定 | 普鲁士蓝染色 |
| 骨质疏松模型 | ccK-8增殖检测 | VG染色 |
| 糖尿病模型 | MTT增殖检测 | EVG染色 |
| 高尿酸血症模型 | CFSE检测增殖-流式检测 | VonKossa染色 |
| 呼吸系统模型 | BrDU检测-免疫荧光法 | 刚果红染色 |
| 肺纤维化模型 | 细胞凋亡 | 苏丹黑B染色 |
| 慢性肺阻塞模型 | Annexin V/PI流式检测细胞凋亡 | Trap染色 |
| 急性肺损伤模型 | WB检测凋亡相关蛋白 | 抗酸染色 |
| 哮喘模型 | 透射电镜观察凋亡小体 | 革兰氏染色 |
| 肺栓塞模型 | Tunel染色(POD法,DAB显色) | AB-PAS染色 |
| 支气管炎模型 | Tunel(荧光法,含试剂盒) | 亚甲基蓝染色 |
| 泌尿生殖系统模型 | DNA ladder法 | 苯胺蓝染色 |
| 慢性肾衰模型 | 细胞周期 | 荧光 DAPI染色 |
| 急性肾衰模型 | 细胞显微计数 | 普鲁士蓝染色 |
| 肾间质纤维化模型 | PI染色 | 间苯二酚碱性品红染色 |
| 肾结石模型 | BrdU渗入法 | 银染 |
| 肾炎模型 | 免疫荧光染色 | 黑色素染色 |
| 子宫内膜异位症模型 | PI流式检测细胞周期 | 镀银染色 |
| 心血管系统模型 | 细胞运动 | PASM 六胺银染色 |
| 冠心病模型 | Transwell检测细胞迁移 | VG染色 |
| 心肌梗死模型 | Transwell检测细胞侵袭 | 富尔根染色 |
| 心脏骤停模型 | 细胞划痕 | 亚甲基蓝染色 |
| 慢性心力衰竭模型 | 细胞克隆 | 碘-碘化钾染色 |
| 动脉粥样硬化模型 | 集落形成法/稀释铺板方法 | Goldner三色法染色 |
| 白血病模型 | 软琼脂克隆法 | PAS-萘酚磺S染色 |
| 高血压模型 | 毛细管克隆法 | 改良苯酚品红染色 |
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