实验原理
活性氧检测试剂盒(Reactive Oxygen Species Assay Kit)是一种利用荧光探针 DCFH-DA进行活性氧检测的试剂盒。DCFH-DA 本身没有荧光,可以自由穿过细胞膜,进入细胞内后,可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而 DCFH 不能通透细胞膜,从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH 生成有荧光的DCF 。检测DCF 的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。
ROS检测方法:传统的细胞内ROS检测方法通过选择合适的荧光探针对细胞进行孵育,然后通过记录细胞所发射的荧光信号值强弱确定细胞内ROS含量。仪器记录的荧光信号值是由每个细胞所发出的荧光强度和总的细胞数所决定的。
定量补偿数量:在污染物暴露过程中,由于污染物的影响可能会导致处理组和对照组之间活细胞数目的差异,因此有必要对各孔剩余的活细胞数量进行定量以补偿细胞数量不同所造成的荧光信号值的差异。 实验流程
- 选择细胞株HepG2作为试验用细胞株,并对试验用细胞株进行消化吹打处理形成细胞悬液。用血球计数板测定细胞悬液中的细胞密度,以每孔10000个细胞的密度将细胞种入96孔板中。
- 种板24h后,对细胞进行染毒暴露,将不同浓度的暴露污染物分别加入不同的孔板中。染毒24h后,将每个孔板中原有培养基采用50μL DCF孵育液替换,于37℃下孵育25min,孵育后用PBS缓冲液清洗,采用酶标仪检测各孔板内细胞的DCF荧光信号值。
- 再向每个孔板加入100μL Red Dot 1孵育液,于37℃下孵育15~30min,孵育后用PBS缓冲液洗涤,采用酶标仪检测各孔板内细胞的Red Dot 1荧光信号值,得到每个孔板中活细胞的数量。将得到的每个孔板中的DCF荧光信号值除以对应孔板中细胞的Red Dot 1荧光信号值,得到不同暴露污染物浓度下对应单个活细胞的DCF荧光信号值。
合作流程
- 咨询客服,提供实验方法、内容以及相关实验要求,项目员、技术员对实验项目进行可行性评估。
- 出具项目报价,签订实验服务合同,双方保密协议,出具详细实验方案,客户寄送实验样本和实验试剂。
- 技术员根据实验方案开展预实验,网站个人中心实时更新实验进度,实验完成出具详细实验报告。
实验须知
- 中科赛恩斯生物坚决秉承“严肃严谨、死磕真实、拒绝造假、绝对保密”的科学服务精神,以及严格的契约精神,为您提供优质实验服务。
- 根据客户实验预期效果,进行一定的实验文献检索,重要步骤均使用知名品牌试剂/设备进行每一步的操作质控。
- 严谨的预实验设置,根据说明要求设置参照样本,用2-3种方式进行实验,为正式实验提供最佳实验条件。
- 使用GraphPad 软件作图,并标记显著性,提供.pzf源始文件。分析数据的原始Al文件和导出的.tif图片,提供完整的实验报告(含:实验分组、实验结果、实验结论、实验步骤)。
细胞内活性氧检测流式检测实验服务生物实验动物实验整体课题外包代做价格
细胞内活性氧检测流式检测实验服务生物实验动物实验整体课题外包代做信息由哈尔滨中科赛恩斯生物技术有限公司为您提供,如您想了解更多关于细胞内活性氧检测流式检测实验服务生物实验动物实验整体课题外包代做报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。