一、产品质量标准与报价:：:

      关于我们的文库构建产品，我们承诺的指标如下: 
原始文库库容量大于1*10^7CFU；
平均插入片段大于1200bp ；
克隆阳性率大于95%。
 
二、技术特点与技术优势:

       1.我们是采用同源重组的方法构建文库，没有经过任何的内切酶切割和连接过程，确保不会出现基因被酶切切断的情况，能够保证基因的完整性，而Clonetech的是用酶切连接的方式构建的。 
       2.由于我们采用的是重组的方式把cDNA重组到载体上，相对clonetech的SMART的T4连接酶的方法效率要高的多，我们承诺原始库的库容量在1*10^7以上。而且重组的方式假阳性很低，我们这里有的客户一次测3万个克隆，都没有出现一个空载的情况，我们承诺阳性率大于98%，这是酶切连接的方法远远无法比拟的。 
       3.Clonetech的SMART方法是用PCR的方法合成第二链的，由于PCR的选择性抑制及竞争性扩增，这样就会造成基因冗余度非常高，低丰度的基因PCR扩增不到，会丢失掉，长片段的基因也会丢失掉，另外会造成重复序列非常多，特别是起始的RNA样本量少的情况（比如5ug RNA以下就需要进行15个循环以上的PCR扩增，大大降低文库质量),，大大降低文库包含的基因数量，而我们的cDNA合成方法是用多种酶在16度恒温的条件下直接合成第二链的，这样就忠于样本自身的基因情况，不会人为的改变样本内的基因情况以及基因大小，大大提到文库的质量。 
        4.我们是采用的一种高质量的反转录酶，较clonetech的反转录酶具有反转录温度高（55摄氏度反转，clonetech的反转录酶是使用42度反转，较高的温度可以打开RNA的二级结构，可以获得更长的cDNA），反转录效率和cDNA长度要好的多。我们承诺文库的平均插入片段在1.3Kbp以上，短的长度也在1Kbp以上，而clonetech的SMART方法构建出来的文库一般只有几百BP。
文库构建流程: 
1.RNA提取 
2.mRNA提取 
3.cDNA的酶促法合成（使用酶促法直接合成，不经过PCR扩增过程，比SMART方法质量大大提高） 
4.cDNA连接接头 
5.cDNA按长度分离 
6.cDNA与酵母单杂交文库载体(pGADT7-Rec2)进行all-direct重组 
7.重组产物电转化 
8.文库检测以及质粒提取
 
三、技术详细比较:

1．与Clonetech(Takara)的SAMRT方法技术比较：

五、服务时间:

      25个工作日内，如需转化酵母延长15个工作日。
备注1：该酵母文库可以选择增加均一化处理步骤，我们使用DSN法均一化方法，可以构建出高质量的均一化酵母杂交文库，可以大大减少后续酵母筛选的工作量和筛选效率等。  

六、材料要求:

        客户构建指定的酵母双杂交cDNA文库，由客户提供组织、细胞或总RNA给我们即可：
 细胞样本：细胞数量大于1*10^7 
 动物样本：大于1g 
 植物样本：大于2g 
 总RNA：大于200ug 

七、客户案例:

       目前我们已经成功完成数千个不用样本的文库构建，主要客户为中国科学院上海植物生理生态研究所、上海交通大学、浙江大学、浙江省农科院、山东省农科院等多家单位完成酵母双（单）杂交文库构建服务，物种包括人、小鼠、大鼠、水稻、拟南芥、牡丹、稻飞虱、苹果、油菜、小麦、贝壳、葡萄、真菌等。

八、文库筛选:

       我们是国内极少数能同时提供文库构建和文库筛选的公司，对于酵母双杂交筛选服务，您只需要提供诱饵基因序列即可，我们会进行以下工作，筛选的报价为3万元整:
1.诱饵载体的测序验证以及构建到双杂交筛选载体上
2.诱饵基因的自激活检测，检测通过后继续下一步实验。
3.诱饵质粒转化酵母细胞，验证合格后再转化文库质粒
4.酵母筛选和3AT条件优化
5.筛选结果的测序
6.筛选结果的回转验证
7.筛选结果递交:包括筛选报告，筛选结果的测序结果和blast结果，筛选结果克隆的质粒实物。

九、FAQ:

9.1. 如何选择合适的文库构建方法进行建库？

      我们是可以同时提供3种文库构建方法的公司，这也足以看出我们公司的技术实力。
3种方法的比较如下：
      1) Clonetech 的SMART方法，该方法基本是被淘汰的，我们上文有详细的技术比较，其好处就是RNA的起始量可以很小，一般只需要几ug即可，该方法成本很低，一般不建议选择。
      2) Invitrogen的方法，该方法质量上较SMART方法要好很多，其对试剂的质量要求也很高，需要全部使用invitrogen的原厂试剂。我们全部使用invitrogen公司试剂进行构建，且做了一些技术改进，提高了文库质量。该方法对起始的RNA要求较高，建议起始用量是大于200ug。但该方法有一个严重的缺点，就是需要进行两次重组才能得到酵母文库，而多一次重组就会多一次文库扩增过程，会严重影响文库质量。在上文中有详细的技术比较和介绍。
       别的使用该方法建库的公司，只能使用商业化的试剂盒构建文库，没有做任何改进。且由于进货渠道的原因，试剂盒内的有些试剂他们是买不到的，质量就会大打折扣。比如DH10B 电转化感受态细胞，这个感受态细胞转化效率比国产的高出100倍以上。这个感受态细胞需要具有一堆的海关批文才能买到，其他公司由于没有相关资质，是无法进口的，据我们了解，国内某公司居然会用化学转化细胞代替电转化，质量影响巨大。
       3) All-Direct方法，这个是我们的改进方法，是在invitrogen方法上做了重要改进，保留了其优点（不用PCR扩增，文库保真度高），去除了其需要经过两次重组的缺点，大大提高文库质量。平均长度较invitrogen方法可以提高200bp，库容量可以提高10倍以上。该方法对RNA的要求量和invitrogen方法一样。
9.2. 海科生物提供的酵母双杂文库有哪些产品内容？
       我们提供的文库产品，包含了文库质粒（大于500ug）以及大肠杆菌文库甘油菌。同时可以选择提供转化到酵母细胞的文库甘油菌，我们会提供100只转化到酵母细胞的文库甘油菌，可以做100次的文库筛选。
       其中文库质粒可以使用共转的方法进行文库筛选，酵母细胞文库甘油菌可以使用maiting的方法进行文库筛选，根据老师的实验习惯可以自由选择，结果没有任何差异的。
9.3. 如何检测文库质量？
       对于文库的质量，一个简单的金标准就是，样本内的所有基因都在文库里，且基因要有一半以上的全长基因，这个文库就是合格的。
       对于文库的检测，可以针对我们交付的产品，做以下几个方面的检测：
       根据老师的样本信息，选择3-5个低拷贝的基因，设计合成引物，以我们提供的文库质粒为模板，进行PCR扩增，如果低拷贝的基因都能扩增出来，高拷贝的就不会丢失，文库质量即可以判断为合格。
        对于我们提供的大肠杆菌文库甘油菌，可以进行梯度稀释后铺板培养，第二天计算库容量，同时挑取单克隆进行PCR扩增和测序检测，以判断插入片段长度和空载率。
9.4. 如何评价文库质量？
       

酵母单杂交文库构建服务价格

酵母单杂交文库构建服务信息由上海宝吉生物技术有限公司为您提供，如您想了解更多关于酵母单杂交文库构建服务报价、型号、参数等信息，欢迎来电或留言咨询。