稳定过表达细胞系构建
 

1. 载体构建&病毒包装

       艾柏森生物提供重组人源化抗体稳定过表达细胞株构建服务。流程如下

       将人源化的抗体基因转接到慢病毒载体上，然后对质粒表达进行检测，通过包装获得过表达目的基因的慢病毒质粒。慢病毒载体系统的包装成分与载体成分一起转染293细胞进行包装；24至48小时后，收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液，浓缩后进行滴度测试。

 

2． 细胞转染

       常用的真核表达载体的抗性标志物有嘌呤霉素(Puromycin)、潮霉素(Hygromycin)和新霉素(Neomycin)。首先确定Puromycin/G418的筛选浓度和病毒转染浓度，然后病毒悬液转染细胞24h,Puromycin/G418筛选稳转株，ELISA和WB法鉴定。

3． 单克隆化

       使用Molecular ClonePix2系统,高通量、自动化的筛选出100-200个高水平分泌克隆，并从中挑选最佳10个高产克隆，进行下一步的稳定性测试。

 

 

4． 细胞系稳定筛选

        细胞株多次传代数次后，就有可能会出现遗传不稳定性。我们挑选出最优的10个克隆，进行10次传代后，qPCR和WB法检测细胞株的稳定性。最后我们提供序列及载体报告, 3株表达最好的细胞株，表达分析、稳定性测试报告以及详细的稳定细胞株构建报告。