肝细胞培养 

初代组织块培养： 
取新鲜肝脏，先剥除被膜和血管等纤维成分，用刀或剪刀把肝脏剪成1mm3 左右的小块，采用帖壁培养法。

初代消化法培养： 

1．把肝组织切成2～4 立方毫米的小块，用不含钙镁的BSS 液洗两次。

2．移入1：1 的0.1％胰蛋白酶和0.1％胶原酶（都用无钙镁BSS 配置）中，4℃冷消化10～12 小时后，通过250 微米和64 微米尼龙网或不锈钢纱网滤过。

3．收集细胞、BSS 液洗1～2 次、计数、接种培养。

消化培养肝细胞的另一种方法是灌流法（肝脏灌流需用全肝，以较小动物如小鼠和大鼠为好）： 

1．无菌解剖动物，取出肝脏，先用BSS 洗除血污。

2．取5ml 注射器一支，吸取消化液后，把注射器头轻轻插入肝管中，用线绳结扎牢固，以防消化液漏出，轻轻把消化液注入肝管系统，并不时轻揉压肝脏，以便消化液进入肝小叶中；消化液在肝内停留20～30 分后，在吸出消化液的同时并轻揉压肝脏，以使肝细胞脱落和消化液吸出。

3．待吸净消化液后，注入离心管中，低速离心分离，用RPMI 1640 培养基培养（较其它培养基为好），能获得较纯的肝上皮细胞和获较好的效果。

传代培养： 
待细胞生长连接成片后，用BSS 洗一二次，加1：1 的0.025％胰蛋白酶和0.02％ EDTA 混合消化3～5 分钟，待细胞回缩，便停止消化，弃掉消化液，用BSS洗一二次，注入营养液，吹打，制成细胞悬液，再接种培养。

无菌操作的注意事项：    

细胞原代培养一定要保持工作区的无菌清洁，先用紫外灯杀菌1h，操作前用75%乙醇消毒，穿上实验服，戴上口罩和帽子，操作时不能大声说话，双手戴上一次性橡胶手套，整个无菌操作都应该在酒精灯的周围进行。

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