β半乳糖苷酶:β半乳糖苷酶由大肠杆菌lacZ基因编码,可催化半乳糖苷水解。最大优势是易于用免疫组织化学法观测其原位表达,是最常用的监测转染率的报道基因之一。以邻—硝基苯—β—D—半乳吡喃糖苷(ONPG)为底物可用标准的比色法检测酶活性,其检测动力学范围为6个数量级。氯酚红—β—D—半乳吡喃糖苷(CPRG)是另一个可用比色法检测酶活性的底物,其灵敏度比ONPG高近10倍。...
试剂和器材: 1.反应缓冲液:5g/L聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)、0.05mol/L柠檬酸钠-磷酸盐缓冲液,pH4.3;2.终止液:0.25%甘氨酸-NaOH,pH10;3.底物:6mmol/L对硝基苯基-β-半乳呋喃糖苷溶于缓冲溶液中;4.微量离心机,带1.5—2.0ml小管;5.分光光度计(可见波长)带1ml比色皿;紫外-可见分光光度法测定酶活酶活测定:以ONPG为底物测定β...
(1)酶法:Na+测定的酶法原理是在Na+离子存在下β-半乳糖苷酶水解邻-硝基酚-β-D-半乳吡喃糖苷(o-Nitrophenyl-β-D-galactopyranoside,ONPG),在420nm波长可测定产物邻-硝基酚(发色团)颜色产生的速率。 K+测定酶法例子是利用色氨酸酶,一定量的K+会增强酶的活性,用测定该反应酶活性的改变来判断K+浓度。...
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