ASTM F2131-02(2007)e1
使用W-20老鼠基质细胞系的重组体人骨形态形成蛋白-2(rhBMP-2)在实验室条件下的生物活性的标准试验方法

Standard Test Method forIn Vitro Biological Activity of Recombinant Human Bone Morphogenetic Protein-2 (rhBMP-2) Using the W-20 Mouse Stromal Cell Line

被代替

标准号

ASTM F2131-02(2007)e1

发布

2002年

发布单位

美国材料与试验协会

替代标准

ASTM F2131-02(2012)

当前最新

ASTM F2131-21

 

 

适用范围

虽然该测试方法可用于评估 rhBMP-2 粗制品的生物活性，但仅经过验证可用于高纯度（> 98% 按重量计蛋白质纯度）的 rhBMP-2.1.1 该测试方法描述使用小鼠基质细胞系 W-20 克隆 17 (W-20-17) 测定 rhBMP-2 的体外生物活性所用方法和结果计算。该克隆源自 W++ 小鼠品系的骨髓基质细胞。
1.2 该测试方法（测定）已根据国际协调委员会测定验证指南（实验室间精度除外）进行了鉴定和验证，用于评估rhBMP-2 的生物活性。还研究了这种体外测试方法与体内骨形成的相关性。 W-20 生物测定中测得的反应（碱性磷酸酶诱导）与体内使用测试 (UT) 中 rhBMP-2 的异位骨形成能力相关。通过两种蛋氨酸的靶向过乙酸氧化而部分或完全失活的 rhBMP-2 被用作比较活性的工具。通过肽图分析和质谱分析表明，用过乙酸氧化 rhBMP-2 可以特异性地靶向蛋氨酸。这些蛋氨酸位于 rhBMP-2 上的疏水性受体结合袋中。将氧化样品与孵育对照和天然对照进行比较。 62%、87%、98% 和 100% 氧化的样品的 W-20 活性水平分别为 62%、20%、7% 和 5%。孵育样品和天然对照样品保持 100% 活性。在 UT 中对样品进行了评估，结果显示失活对骨形成活性具有类似的影响。相对于孵育对照，W-20 测定中活性为 62% 和 20% 的样品显示骨形成水平降低，与 W-20 比活性降低的水平相似。在 7% 和 5% 活性 rhBMP-2 植入物中很少或没有形成异位骨。
1.3 因此，受体结合位点中 rhBMP-2 分子的修饰降低了 W-20 和 UT 测定中的活性。这些数据表明 rhBMP-2 上的单个受体结合结构域负责体外和体内活性，并且 W-20 生物测定是 rhBMP-2.1.4 骨形成活性的相关预测因子。 SI 单位中规定的值应被视为标准。
1.5 本标准并不旨在解决与其使用相关的所有安全问题（如果有）。本标准的使用者有责任在使用前建立适当的安全和健康实践并确定监管限制的适用性。

ASTM F2131-02(2007)e1相似标准

推荐