当外源基因插入时,二者溶为一体后,有β-半乳糖苷酶表达,在生色底物5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(x-gal)培养基中形成兰色菌落。而当有外源基因插入到多克隆原点,从而造成插入失活,而使 lacZ基因不表达而形成白色菌斑。 通过颜色不同而区分重组子和非重组子。位于不同载体或染色体上的...
根据gus基因检测所用的底物不同,可以选择三种检测方法:组织化学法、分光光度法和荧光法(灵感度为分光光度检测法最高)。其中最为常用的是组织化学法。组织化学法检测以5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸(X-Gluc)作为反应底物,将被检材料用含有底物的缓冲液浸泡。若组织细胞发生了gus基因的转化,并表达出Gus,在适宜的条件下,该酶就可将X-Gluc水解生成蓝色产物。...
在IPTG(异丙基硫代β-D-半乳糖苷)的诱导下,β半乳糖苷酶能将X-Gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)切割成半乳糖和蓝色的底物5-溴-4-靛蓝。因此,任何携带lacZ基因的质粒载体转化到β半乳糖苷酶突变的大肠杆菌细胞后,都会在涂有IPTG和X-Gal的培养基平板上形成蓝色菌落。...
β-半乳糖苷酶基因在基因工程中的应用:β-半乳糖苷酶基因被广泛地应用于包括作为报告基因、构建载体、转基因研究和基因治疗等多个分子生物学研究领域。具体介绍如下:1在载体构建中的应用β-半乳糖苷酶可催化X-ga1(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷) 水解,产物呈蓝色,易于检测和观察,基于这一特点,β-半乳糖苷酶基因常作为载体组分,广泛地应用于各类研究中。...
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