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但在pBS 和DH5α融为一体时可形成具有酶活性的蛋白质。这种lacZ 基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的β-半乳糖苷酸阴性突变体之间实现互补的现象叫α-互补。由α-互补产生的Lac+ 细菌较易识别,它在生色底物X-gal(5-溴-4氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)下存在下被IPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)诱导形成蓝色菌落。...
当外源基因插入时,二者溶为一体后,有β-半乳糖苷酶表达,在生色底物5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(x-gal)培养基中形成兰色菌落。而当有外源基因插入到多克隆原点,从而造成插入失活,而使 lacZ基因不表达而形成白色菌斑。 通过颜色不同而区分重组子和非重组子。位于不同载体或染色体上的...
在IPTG(异丙基硫代β-D-半乳糖苷)的诱导下,β半乳糖苷酶能将X-Gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)切割成半乳糖和蓝色的底物5-溴-4-靛蓝。因此,任何携带lacZ基因的质粒载体转化到β半乳糖苷酶突变的大肠杆菌细胞后,都会在涂有IPTG和X-Gal的培养基平板上形成蓝色菌落。...
2、 互补法:现在使用的许多载体(如PUC系列)有含有一个大肠杆菌DNA的短区段,其中含有β-半乳糖苷酸基因(lacZ)的调控序列和头146个氨基酸偏码区。这个偏码区中插入一个多克隆位点。受体菌则含编码β-半乳糖苷酶C端aa的序列。当外源基因插入时,二者溶为一体后,有β-半乳糖苷酶表达, 在生色底物5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(x-gal)培养基中形成兰色菌落。...
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