兴奋剂检测-放射免疫分析基本原理

上一篇 / 下一篇 2008-07-26 10:23:26/ 个人分类：分析方法

兴奋剂检测-放射免疫分析基本原理

来源：现代仪器网

RIA是把放射性核素测定与抗原、抗体间的免疫化学反应两种方法巧妙地结合起来所形成的一种超微量物质的测定方法。由于标记物放射性核素的检测灵敏性，本法的灵敏度高达ng甚至pg水平。测定的准确性良好，ng量物质的回收率接近100％。本法特别适用于微量蛋白质、激素和多肽的定量测定。

RIA的基本原理，是利用标记抗原(xAg)和非标记抗原(Ag)对特异性抗体(Ab)发生竞争性结合。竞争结合反应可用下式表示：

*Ag + Ab←→*Ag-Ab

↓↑

Ag-Ab

在上述反应系统中，当只有xAg和Ab时，只产生xAg-Ab复合物，并保持可逆的动态平衡。如反应系统中同时加入Ag，因Ag与xAg免疫活性完全相同，故与Ab具有相同的亲和力。当xAg为一定量、Ab为有限量、Ag与xAg的量之和超过Ab上的有效结合位点时，xAg-Ab复合物的生成量与Ag的量之间呈一定的函数关系。即当Ag量少时，Ag-Ab生成量少，而xAg-Ab生成量增多，游离的xAg减少。可见xAg-Ab

复合物生成量是受Ag含量制约的。因此，在放射免疫分析中，用已知不同浓度的标准物和一定量的xAg及限量的Ab反应，采取一定方法将结合相(B)与游离相(F)分开，即可算出该标准物在各浓度下xAg-Ab复合物的结合百分率(B／T)。

这一反应过程，可用以下简图说明。图中黑圈表示标记抗原，白圈表示非标记抗原，长条代表抗体，每个抗体有两个结合位点，标记抗原与非标记抗原对抗体有同等的结合能力。