隐丹参酮在夫鼠体内的药代动力学研究

中文摘要 1.背景:隐丹参酮(cryptotanshinonecT)是从祖国传统中药丹参中提取 的一种活性有效单一脂溶性成分，经大量研究证实隐丹参酮具有抗菌、消炎及雌 激素样作用。最近的研究表明隐丹参酮可以与氨、苯乙胺及苯乙醇胺在温和的条 件下反应，可能对于治疗高血氨症有疗效。动物实验模型也证明，隐丹参酮能有 效清除体内(血液和脑组织)有毒氨(胺)类物质，具有开发成治疗肝性脑病与 亚临床性肝性脑病I类新药的良好前景。 2.目的及内容:本实验作为隐丹参酮I类新药开发的一部分，目的在于建立 检测动物体内隐丹参酮浓度的方法，并运用该方法研究大鼠口服隐丹参酮纯品及 不同隐丹参酮制剂的药代动力学行为，为药物的临床前研究提供实验数据。实验 分为四个部分:(1)建立检验大鼠生物样本隐丹参酮浓度的快速、灵敏、稳定性好 的HPLC法;(2)大鼠口服隐丹参酮的相对生物利用度的研究; (3)几种隐丹参酮制 剂的筛选; (4)大鼠口服低、中、高三个剂量隐丹参酮的药时曲线。 3.方法:HPLC法以氟西汀(fluoxetine FXT)为内标，依利特C.。色谱柱 (4.6×150mm，5pm)作为固定相，流动相为72%的甲醇，28%的硼酸/氯化钾缓冲 液(PH=9.4)，流速1.2ml/min，紫外检测波长270nm。取大鼠血浆或组织匀浆，按 比例加入2.Omg/mlvitC溶液以抗氧化，加入内标涡旋后，加入三倍体积乙醚， 静置后离心，吸取上清液。室温下真空挥干，甲醇水溶液溶解残渣，去蛋白处理 后进样。选用sD大鼠进行隐丹参酮纯品的相对生物利用度研究，大鼠分别腹腔注 射及口服隐丹参酮纯品后于不同时间点从尾尖采血，通过比较药代动力学参数探 讨隐丹参酮纯品在大鼠体内是否存在吸收;接着用同样的方法进行了3种隐丹参 酮制剂的筛选，最后筛选出吸收最佳的制剂(2#)进行大鼠口服三个剂量组隐丹 参酮制剂的实验。sD大鼠于实验前一天乙醚麻醉，行右侧颈静脉插管手术，禁食 隐丹参酮在大鼠体内的药代动力学研究 12小时后于次日按低、中、高三个剂量组口服给药，给药后不同时间点由右颈静 脉插管取血。每次取血后立即于插管处补充与取血量相当的肝素生理盐水或新鲜 血液。采集的血样置于肝素化EP管中加入一定量的抗氧化剂，分离血浆，一20℃ 保存至处理。 4.结果:上述色谱条件下，隐丹参酮加料样品中药物与内标分离良好。血浆 标准曲线在5.0-2000ng/ml范围内呈良好线性关系，相关系数R=O.99998(n=9): 最低检测浓度为5ng/val，日内精密度为1.83-3.71%，日间精密度为2.36-6.91%， 平提取回收率为74.3卜91.78%。各组织标准皓线0.卜2.Oug/ml范围内线性关系良 好，R值在0.9992与0.99998之间;日内精密度均小于15%。相对生物利用度实 验表明，隐丹参酮纯品在大鼠体内存在吸收，但吸收低且不规则，峰浓度不明显，相 对生物利用度约为20.07%。通过体内实验进行隐丹参酮不同制剂筛选发现，隐丹参 酮2#制剂的达峰浓度及AUC与纯品及其他制剂相比有显著提高。选用2#制剂进行 三个剂量组的药代动力学实验，结果表明，大鼠口服隐丹参酮的药时曲线呈大部分 显著双峰现象，各剂量组T。kl为(1.50±0.58)h-(2.33±1.37)h;T。。为 (5.40±0.55)h一(5.60±0.55)h。AUG随着给药剂量增加而增加。第一峰浓度 cpeakt与第二峰浓度c。tz分别随给药剂量增加而增加;第二峰后下降部分的T。在 各剂量组无显著性差异，为(2.27±0.99)h一(2.38±1.33)h。 5.结论:本实验建立了一种良好的HPLC方法用于测定大鼠生物样本中隐丹参 酮的浓度，本分析方法灵敏准确、重复性好、可信性高、简便且易于推广，能满 足药物在大鼠体内的药代动力学的研究。隐丹参酮纯品口服给药在体内存在吸收 但生物利用度较低且吸收不规则;进行制剂改良后，2#制剂的体内吸收最优。大鼠 口服2ulJ剂的血浆药物浓度一时间曲线呈双峰特征;隐丹参酮2#制剂在大鼠体内 30-300 mg/Kg的剂量范围内呈线性特征。