糖类物质的HPLC柱前衍生化新方法研究及其MALDI-TOF-MS分析

　　摘 要

　　高效液相色谱(HPLC)已经成为糖类物质分析的重要工具，但由于糖类物质没有紫外或荧光吸收，需对样品进行柱前衍生使它带上紫外或荧光基团，从而可通过紫外或荧光检测器对其进行检测。由于已有的各种衍生试剂都有衍生反应难控制或质谱检测灵敏度不高的等局限性，不能很好地满足当前糖生物学分析的需要。因此，继续研究开发新的高灵敏衍生化试剂及方法有着重要意义。本论文重点研究了一种新型糖类物质柱前衍生化方法，首次以3-氨基-9-乙基咔唑(3-amino-9-ethylcarbazole，AEC)作为衍生化试剂对糖类物质进行柱前衍生化HPLC分离和MALDI-TOF-MS分析。对反应条件和色谱条件进行了优化，对方法进行了考察，并用该衍生化方法对不同生物样品进行了分析，取得了很好的效果。本研究主要取得了以下的研究成果和结论：

　　1. 首次将AEC试剂用于标准单糖的柱前衍生化，利用HPLC和MALDI-TOF-MS分析对反应结果进行检测和分析。对反应条件进行了优化，并考察了方法的稳定性、灵敏度、检测限等。结果显示：衍生化方法反应温和(70℃反应60 min)，衍生物不用脱盐处理即可直接进行质谱分析，检测灵敏度高，避免了微量样品的损失。该方法的灵敏度高，最低检测限达0.06 ng·mL-1;稳定性好，存储5天的样品的相对标准偏差(RSD)<3%;准确度高，样品的平均回收率大于98%。