抗体的鉴定

上一篇 / 下一篇 2017-01-06 12:17:30/ 个人分类：科研干货

抗体是最常用的研究工具，常规地用于免疫印迹（WB）、免疫沉淀（IP）、酶联免疫吸附（ELISA）、定量免疫荧光（QIP）和免疫组织化学（IHC）。抗体还是临床操作中的重要工具，在检验医学（ELISA检测和流式细胞术）和病理解剖（IHC）方面广泛被使用。在病理解剖中，IHC作为一种诊断、预后和预测的方法，并且在临床上，IHC的数据结果直接影响对病人的治疗。例如，对乳腺癌患者采用IHC来检测雌激素受体α(ER-α)和人表皮生长因子受体2（HER2）来决定一个病人是否需要接受治疗，该项治疗每年多达100,000美元。因此，在临床以及实验室研究中，仔细准确的检测抗体试剂对正确的结果至关重要。

抗体的效价鉴定

不管是用于诊断还是用于治疗，制备抗体的目的都是要求较高效价。不同的抗原制备的抗体，要求的效价不一。鉴定效价的方法很多，包括有试管凝集反应、琼脂扩散试验、酶联免疫吸附试验等。常用的抗原所制备的抗体一般都有约成的鉴定效价的方法，以资比较。如制备抗抗体的效价，一般就采用琼脂扩散试验来鉴定。

抗体的特异性鉴定

抗体的特异性是指与相应抗原或近似抗原物质的识别能力。抗体的特异性高，它的识别能力就强。衡量特异性通常以交叉反应率来表示。交叉反应率可用竞争抑制试验测定。以不同浓度抗原和近似抗原分别做竞争抑制曲线，计算各自的结合率，求出各自在 IC50时的浓度，并按下列公式计算交叉反应率。如果所用抗原浓度IC50浓度为pg/管，而一些近似抗原物质的IC50浓度几乎是无穷大时，表示这一抗血清与其他抗原物质的交叉反应率近似为 0，即该血清的特异性较好。

抗体的亲和力

是指抗体和抗原结合的牢固程度。亲和力的高低是由抗原分子的大小、抗体分子的结合位点与抗原决定簇之间立体构型的合适度决定的。有助于维持抗原抗体复合物稳定的分子间力有氢键、疏水键、侧链相反电荷基因的库仑力、范德华力和空间斥力。亲和力常以亲和常数K表示，K的单位是L/mol，通常K的范围在 108 ～1010 /mol，也有多达 1014 /mol。抗体亲和力的测定对抗体的筛选，确定抗体的用途，验证抗体的均一性等均有重要意义。