紫外分光光度法测定薄叶鸢尾中总异黄酮的含量

作者:顾丛峰

摘要 目的：建立紫外分光光度法测定薄叶鸢尾中总异黄酮的含量。方法：药材粉末经80%乙醇提取1小时后，

采用紫外分光光度法，检测波长为264nm对薄叶鸢尾中总异黄酮的含量进行测定。结果：采用该方法可以准确地测定薄叶鸢尾中总异黄酮的含量，鸢尾苷在3.44～20.64μg/ml范围内峰吸光度与浓度线性关系良好(r=0.9999，n=5)，样品平均回收率为102.5%，精度密RSD为0.2%(n=5)，重复性RSD为4.2(n=5)，稳定性RSD为0.2%(6小时内)。结论该方法简单，准确，可用于薄叶鸢尾中总异黄酮的含量测定。

关键词 薄叶鸢尾;总异黄酮;紫外分光光度法

Determination of the Total Flavonoides in Iris leptophylla by UV Spectrophotometry

Abstract Objective：To establish a UV spectrophotcmen‘y for determination of the total flavonoides in Iris lepmphylla Methods：The power of Iris leptophlla was extracted by 80% ethanol for one hour.When it was deteuninated by UV Spectrophotometry，wave length is 264nm.Results：The method had good linear relationship from 3.44μg/ml to 20.64μg/ml.The recovery rate is 102.5%.The relative standard deviation of accuraly test and stability test are 0.2% and 4.2%respectively Conclusion：The method is simple and accttrate.and can be use for determination of the total flavronoides in Iris leptophylla.

Key words Iris leptophylla;total flavonoides;UV spectropthcrnelry

鸢尾属植物中所含特征性成分为异黄酮，故前人采用许多分析方法对其中所含异黄酮成分进行定性鉴别与含量测定。曾采用的方法有紫外分光光度法、薄层色谱扫描法、方波伏安分析法、RP-HPLC法等。薄叶鸢尾是四川当地习用生药，具有积消、泻下作用，但薄叶鸢尾至今没有确切的质量标准。为对其进行深入的研究和评价，作者采用紫外分光光度法对薄叶鸢尾中的总异黄酮含量进行测定。

1 仪器与试药

752紫外光栅分光光度计(上海分析仪器制造厂)：十万分之一分析天平(上海天平仪器厂)。鸢尾苷对照品为自提，结构经UV、H-NMR及C-NMR鉴定，纯度经HPLC(检测达98%以上。其它试剂均为分析醇。药材样品均采自四川汶川，分别为92年样品，01年居群1、2样品，02年居群1、2、3样品，共六份样品，均经鉴定为薄叶鸢尾Iris leptophylla的干燥根茎。

2 实验方法与结果

2.1 对照品及供试品溶液的制备

2.1.1 对照品溶液的制备：

精密称取对照品鸢尾苷0.860mg，置于25ml量瓶中，用80%乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，配制成0.0344mg/ml的溶液。

2.1.2 供试品溶液的制备：

精密称取薄叶鸢尾药材粉末(60目)30mg，加80%乙醇20ml，热回流提取l小时，趁热过滤。放冷，置于25m1容量瓶中定容，摇匀。精密量取lml于l0ml容量瓶中定容。

2.2 检测波长的选择

对照品溶液及供试品溶液在200-400nm间进行扫描，发现均在264nm附近有最大吸收峰，由于264nm处吸收较强，故试验中选择测定波长为264nm。

2.3 线性关系的考察

分别精密吸取1、2、4、6、8、10、12ml对照品溶液置于5Oml容量瓶中，加80%乙醇定容至刻度，摇匀;以80%乙醇为空白对照，于264nm处测定吸收度。用最小二乘法以浓度(X，mg/m1)对吸收度(Y)进行线性回归，回归方程为：Y=46.661X一0.0255(R=0.9999)线性范围3.44×10-3～2.064×10-2mg/ml

2.4 提取方法的考察

2.4.1 提取溶剂对提取效率的影响

称取四季青药材粉末(60目)30rag，分别加90%乙醇、80%乙醇、70%乙醇，60%乙醇、水、甲醇2Oml，按“2.1.2项”下操作制备供试品溶液。以各自的溶剂为空白，于264nm处测定吸收度，按标准曲线计算总异黄酮含量(以鸢尾苷计)。

结果表明，提取溶剂以80%乙醇最好。

2.4.2 提取时间对提取效率的影响

称取薄叶鸢尾药材粉末(60目)30mg，加80%乙醇20ml，按照“2.1.2项”下操作，分别加热回流0.5、1、2、3、4、5h。以80%乙醇为空白对照，于264nm处测定吸收度，按标准曲线计算总异黄酮含量(以鸢尾苷计)。

结果表明，提取1小时即可将总异黄酮基本提取完全。根据以上结果，确定提取条件为80%乙醇提取1小时即可。

2.5 重复性实验

称取样品粉末30mg，按以上确定提取方法，按“2.1.2项”平行制备5份样品，以80%乙醇为空白对照，在264nm进行测定吸光度。

2.6 精密度实验

取同一份对照品溶液，在264nm测定其吸光度，连续测定5次。结果表明，仪器精密符合要求。

2.7 稳定性实验

取样品适量，按“2.1.2项”制备供试品溶液，以80%乙醇为空白对照，在264nm下进行测定，每隔1小时测定一次，连续测5小时。结果表明，样品溶液在5小时内稳定。

2.8 加样回收率实验

精密称取薄叶鸢尾药材粉末(60目)约200mg(5份)，分别加对照品适量，加20ml甲醇，加热回流，放冷，用甲醇定容到25ml，摇匀。以80%乙醇为空白对照，在264nm下进行测定，计算加样回收率。

回收率(%)=[(测得量一药材原含量)/加入量]*100%结果表明，该方法加样回收率良好，符合分析要求。

2.9 样品测定

精密称取薄叶鸢尾药材粉末(60目)约30mg,加80%乙醇，加热回流，放冷，于25ml容量瓶中定容，摇匀。精密量取lml溶液于10ml容量瓶中，稀释至刻度。所得溶液于264nm处测定吸收度。按照标准曲线计算总异黄酮含量(以鸢尾苷计)。

3 讨论

3.1 异黄酮成分为薄叶鸢尾根茎中的主要成分，与其它异黄酮成分相比，鸢尾苷的含量比其它的异黄酮高很多，所以采用鸢尾苷为标准品来计算总异黄酮的含量。

3.2 样品测定结果表明，6份薄叶鸢尾样品中总异黄酮的含量都在10%以上，其中92年药材总异黄酮含量最高。01年居群1的总异黄酮含量最低。

3.3 有关薄叶鸢尾中总异黄酮的含量测定方法没有报道。本文采用紫外分光光度法对薄叶鸢尾中总异黄酮的含量进行测定，是一种方便有效的含量测定方法，为对薄叶鸢尾进行全面质量评价提供了一定的科学依据。