iTRAQ蛋白组学技术应用

　　iTRAQ（isobaric tags for relative and absolute quantitation）技术是由AB SCIEX公司研发的一种体外同重同位素标记的相对与绝对定量技术，利用多种同位素试剂标记蛋白多肽N末端或赖氨酸侧链基团，经高精度质谱仪串联分析，可同时比较多达8种样品之间的蛋白表达量，是近年来定量蛋白质组学中应用最广泛的高通量筛选技术。

iTRAQ试剂分为报告基团、平衡基团、氨基酸反应基团，报告基团共有8种（113、114、115、116、117、118、119、121Da），与平衡基团质量相加正好是305Da。氨基酸反应基团与肽链N端赖氨酸侧链共价链接，从而将报告基团和平衡基团标记到肽段上。在一级质谱中，不同来源的相同肽段被连接上总质量相同的iTRAQ标签试剂，具有相同的质荷比，表现为一个峰。在二级质谱中，iTRAQ标签试剂在不同基团连接处发生断裂，表现出不同质荷比的峰（平衡基团发生中性丢失）。根据波峰高度和面积，可以得到同一蛋白在不同样本中或在不同处理条件下的表达差异。

 

灵敏度高：可检测出较低丰度蛋白，胞浆蛋白、膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白等； 

分离能力强：可分离出酸/碱性蛋白，小于 10K 或大于200K的蛋白、难溶性蛋白； 

高通量：可同时对8个样本进行分析，特别适用于采用多种处理方式或来自多个处理时间的样本的差异蛋白分析； 

结果可靠准确：定性与定量同步进行，同时得出鉴定和定量结果，重复样品间的蛋白表达量相关性可达到 0.95 以上； 

自动化程度高：液质连用，自动化操作，分析速度快，分离效果好。 

 

除了涉及iTRAQ蛋白质组学实验样品、实验流程、质谱下机原始数据等，质谱数据分析也显得尤为重要，试想拿到数据却无法分析，无法得知实验最终结果是否与预期相符，可谓是万里长征只差一步。大数据时代的到来引起了高校对大数据分析关注，很多都陆续添加了生物信息学、生物统计学等课程，如果此刻的您也很感兴趣，不妨多深究下。

iTRAQ鉴定：包括鉴定结果统计、重复性分析、Unique肽段数分布、肽段长度分布、蛋白覆盖度分布；

iTRAQ定量：包括定量信息统计、蛋白质丰度比（FC）分布、表达量层次聚类分析；

蛋白质功能注释：包括GO注释、COG注释和Pathway代谢通路注释；

差异蛋白的富集分析：包括差异蛋白的GO富集分析、差异蛋白的Pathway富集分析。

        如果要做iTRAQ蛋白质组服务，需要注意什么呢？样本，外包公司销售会和您沟通的，不同样本由于高丰度/低丰度蛋白含量不同也会有差异的，还不如先让对方技术评估下实验方案。可能要强调一点，最后质谱下机原始数据需要结合数据库检索，所以要求物种具有蛋白质参考数据库、EST 序列（转录组）或基因组注释信息等，不清楚的，可以请外包公司帮您查下。

         iTRAQ现今发表文献网上有很多，可以下载学习，通过文献可以更清楚了解iTRAQ技术应用，也可@3268908524索取相关iTRAQ发表文献，加深对iTRAQ蛋白质组学的理解，拓宽项目实验设计思路。

下期接着回归到非编码RNA上，也是小编对非编码RNA很感兴趣，就是这么任性！换个方向，也换个视野，知识都需要消化吸收，才能更好地加以利用。一本正经地说，噗嗤……