焦测序法检测禽流感病毒

《分析化学》2008年06期 

焦测序法检测禽流感病毒 
汪维鹏;武海萍;周国华
  　　以焦测序技术为检测平台,在研究禽流感病毒基因特性的基础上,建立一种检测禽流感病毒及确定其是否为高致病性禽流感病毒的序列测定法。首先,选择一段保守的M基因序列及一段包含裂解位点的HA基因序列为研究对象,采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增技术初步判断其是否为禽流感病毒及病毒亚型;然后采用焦测序法检测目的片段序列;最后,对焦测序法检测序列进行分析,从基因序列上判断其是否为禽流感病毒,并进一步判断病毒的亚型以及是否为高致病性禽流感病毒。研究结果表明,当焦测序反应中三磷酸酰苷双磷酸酶(Apyrase)的浓度为1.6U/mL时,能有效抑制错误信号的产生;当Klenow的浓度为90U/mL时,可读序列长度为33个碱基。采用优化的焦测序反应体系测定了4个样本,其中1个样本被判断为H5N1亚型禽流感病毒,具有潜在的高致病性;另外3个样本为H9N2型禽流感病毒,具有低致病性。本方法具有准确、快速和实时检测等优点。
【作者单位】：华东医学生物技术研究所;华东医学生物技术研究所;华东医学生物技术研究所 南京210002苏州大学药学院药物分析教研室;苏州215123;南京210002;南京210002南京大学医学院;南京210093
【关键词】：禽流感病毒;亚型;致病性;焦测序法
【基金】：国家自然科学基金(No.30470454);日本日立中央研究所资助项目
【分类号】：R450
【DOI】：CNKI:SUN:FXHX.0.2008-06-018
【正文快照】：
　　1引言禽流感是由正黏病毒科A型流感病毒引起的禽类急性传染病,被世界动物卫生组织(OIE)和我国《家畜家禽防疫条例》列为A类烈性传染病。由高致病性禽流感病毒H5亚型引发的禽流感的爆发和流行,给我国及其它国家的养禽业造成了巨大的经济损失;严重的威胁人类健康。因而,建立一种