《
分析化学》2008年04期
溴化氰裂解结合电喷雾串联
质谱测定电泳分离
蛋白的C端序列
高彦飞;李萍;王鸿丽;刘炳玉;魏开华;张学敏;杨松成;王红霞
C端测序是
蛋白质及多肽一级结构确认的重要组成部分,也是重组蛋白药物质量控制的重要依据。建立了溴化氰裂解结合电喷雾串联质谱测定蛋白质C端序列的方法,并应用于重组人
肿瘤坏死因子受体和纽兰格林的C端测序。首先根据待测蛋白序列进行溴化氰理论裂解,如果C-端肽段理论分子量在500~5000U之间,则将待测样品进行SDS-PAGE分离,考马斯亮兰染色,然后进行胶内溴化氰裂解,最后应用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定C-端肽段的分子量,电喷雾串联质谱对C端肽段进行测序。应用本方法分别测定了这两个蛋白质C端19个和11个氨基酸残基序列。研究结果表明:本方法灵敏、有效、实用性较强,可适用于部分重组蛋白药物的质量控制和蛋白质的结构确证,是对目前蛋白质C端测序方法的有效补充。
【作者单位】：国家
生物医学分析中心 北京100850
【关键词】：C端测序;溴化氰裂解;电喷雾串联质谱;重组蛋白
【基金】：
北京市
自然科学基金资助项目(No.2062022)
【分类号】：Q51
【DOI】：CNKI:SUN:FXHX.0.2008-04-028
【正文快照】：
1引言随着
基因工程和蛋白质工程的发展,越来越多的重组蛋白药物将被研发并走向市场。为保证重组蛋白药物的质量,中国
药品和
食品监督管理局规定:重组蛋白药物报批必需提供包括N端、C端、二硫键、肽质量指纹谱等有关一级结构确证的数据。因此建立蛋白质C端测序方法并应用于重组蛋