柱温和流速对反相离子对色谱法分析寡核苷酸的影响

《分析化学》2008年05期   
 
  柱温和流速对反相离子对色谱法分析寡核苷酸的影响
  骆雪芳;尹小英;付静静;胡育筑
  　　通过不同长度n/(n-1)系列和同长n系列寡核苷酸样品在柱温25℃~45℃和流速0.3~0.7 mL/min条件下分离度的变化趋势,研究了离子对色谱法中温度、流速对不同性质寡核苷酸模拟样品保留和分离的影响特点。结果显示:n/(n-1)系列样品的分离度随柱温增加逐渐增大;n系列3组样品则呈现增加、减小和基本不变3种趋势,其中长度相同、碱基组成相同的寡核苷酸样品随温度增加,分离度几乎线性下降。温度并非仅通过影响寡核苷酸分子的传质来改变分离,还可能通过影响不同序列的空间结构改变碱基的空间容量。两系列样品均在流速0.4 mL/min获得最大分离,相对较低的流速可提高寡核苷酸样品的传质,有利于分离,在优化流速的同时应考虑流速改变对梯度洗脱中有机溶剂比例变化率的影响。
【作者单位】：中国药科大学分析化学教研室;江西中医学院药学院;中国药科大学分析化学教研室;中国药科大学分析化学教研室 南京210009;南昌330004;南京210009;南京210009;中国药科大学药物质量与安全预警教育部重点实验室;南京210009
【关键词】：寡核苷酸;反相离子对色谱法;流动相流速;色谱柱温度
【分类号】：R917
【DOI】：CNKI:SUN:FXHX.0.2008-05-014
【正文快照】：
　　1引言随着寡核苷酸合成技术的发展和成本的下降,合成寡核苷酸在基因分析、疾病诊断、核酸测序以及反义治疗等诸多领域的应用日益广泛[1~4]。尤其是反义核酸药物的研发为治疗病毒感染和肿瘤等疾病开辟了一个新的有效途径[5,6]。在各种寡核苷酸样品的分离纯化和分析应用中常用的