《
色谱》2008年03期
疏水型色谱饼对人血清
蛋白质组学样品的快速分离与制备
李瑛;白泉;陈刚;王骊丽
建立了疏水型色谱饼(10mm×20mm i.d.)与反相色谱(RPLC)离线二维色谱快速分离制备人血清蛋白质组学样品,并用基体辅助激光解吸电离飞行时间
质谱(MALDI-TOF MS)进行
检测的方法。以4种
标准蛋白质的稀溶液为模型进行分离富集,得到
细胞色素c(Cyt-c)与肌红蛋白(Myo)的检出限均为1pmol/μL,溶菌酶(Lys)和胰岛素(Ins)的检出限为0.1pmol/μL。将此方法用于人血清蛋白质组学样品的分离与制备,随着血清处理量的增大,质谱可检出的组分数目与信号强度均增加,当血清处理量达到1.0mL时,可检出低丰度蛋白质或多肽285个(相对分子质量均在15000以下)。研究中将1μgCyt-c加入到0.5mL血清中,用上述方法在分离富集低丰度Cyt-c上取得了很好的效果。结果表明,采用疏水型色谱饼与反相色谱联用技术不仅可对血清样品中低丰度蛋白质进行有效的分离和富集,而且一次样品的处理量大,可显著提高低丰度蛋白质的
分析、检测水平。
【作者单位】：西北大学现代分离
科学研究所现代分离科学陕西省
重点实验室西北大学合成与天然功能分子
化学教育部重点实验室 陕西西安710069
【关键词】：
二维液相色谱;基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱;色谱饼;蛋白质组学;人血清
【基金】：国家“863”计划项目(No2006AA02Z227);陕西省重点实验室重点科研计划项目(Nos02JS10,05JS62)
【分类号】：R446.1
【DOI】：CNKI:SUN:SPZZ.0.2008-03-016
【正文快照】：
蛋白质组学是当今
生命科学中最活跃的研究领域。然而,如何有效地去除样品中的高丰度蛋白,分离富集低丰度蛋白,这不仅是蛋白质组学样品制备的重要研究内容,也是制约蛋白质组学发展的瓶颈问题[1-3]。目前,蛋白质组学研究采用的分离技术主要是二维凝胶电泳(2D-PAGE)[4-6]和多维色