绿色荧光蛋白为传能对的供体光漂白法测定FRET效率的探讨

《分析测试学报》2008年02期    
 
  绿色荧光蛋白为传能对的供体光漂白法测定FRET效率的探讨
  周晓娟;郭慧芳;刘德龙;孙大业
  　　探讨以两种新荧光蛋白MiCy,mKo为传能对并应用供体光漂白法测量荧光共振能量转移(FRET)效率。首先通过基因工程方法表达纯化了这两种蛋白,并测量了荧光光谱及光漂白性质,表明MiCy极易光漂白而mKo抗光漂白。进一步以Ni-NTA-agarose为FRET模型,在Confocal上对MiCy进行光漂白时间常数的测量,并计算了FRET效率。结果表明MiCy-mKo传能对适合用供体光漂白法测量FRET效率,此传能对将在蛋白质相互作用研究中有广泛应用。
【作者单位】：河北师范大学化学学院;河北师范大学生命科学学院;河北师范大学化学学院;河北师范大学生命科学学院 河北石家庄050016;河北石家庄050016;河北石家庄050016;河北师范大学生命科学学院;河北石家庄050016;河北石家庄050016
【关键词】：绿色荧光蛋白;荧光共振能量转移;FRET效率;光漂白
【基金】：国家自然科学基金资助项目(20475013)
【分类号】：Q503
【DOI】：CNKI:SUN:TEST.0.2008-02-007
【正文快照】：
　　随着后基因组时代的到来,蛋白质相互作用的重要性已越显突出[1]。鉴定和表征蛋白质相互作用是在分子水平上理解生命运动的前提。分子间荧光共振能量转移技术(FRET)是实时探测蛋白质相互作用的有效方法[2]。目前测量FRET的技术主要有:双通道比值法、三组滤光片法(FRETN法)、荧光