His.Bind基质选择指南

注：与任何纯化介质一样，His.Bind树脂在接近结合载量时使用，可获得最干净的分离效果

Novagen的His.Bind*系列树脂和试剂盒产品是通过固定化金属亲和层析（IMAC）快速一步纯化His.Tag序列蛋白的最佳选择。His.Tag序列（6、8或10个连续的组氨酸残基）与固定在基于NTA-和IDA-的His.Bind树脂上的二价阳离子Ni2+结合，洗去未结合蛋白后，用咪唑或稍低的pH洗脱并回收目标蛋白。该通用系统可在温和、非变性条件下，或采用6M胍或尿素纯化融合蛋白。
下表所列的不同His.Bind介质及其在融合蛋白纯化中的应用。你可以从中选择到：方便处理多个样品的小量纤维素柱和筒，或用于批次生产和重力流柱子的大量易操作的琼脂糖，或以最少处理时间快速纯化多个样品的His.Bind磁性琼脂糖珠，以及适合生产级纯化的高流速SuperflowTM和Fractogel?树脂。有些介质提供预装了Ni2+（NTA或IDA化学基团）的形式的产品。
His.Bind*纯化试剂盒
使用His.Tag?/His.Bind?技术，可根据His.Tag序列组氨酸与固定化金属离子（通常为Ni2+）的亲和力来进行纯化。金属螯合到固相支持物共价结合的反应性基团上。最常用的螯合物包括氮川乙酸（NTA）和亚氨二乙酸（IDA），分别具有四个和三个与金属离子相互作用的位点。在天然和变性条件下，这两种化学基团在亲和介质和目标蛋白的结合、洗涤和洗脱条件下特性有所不同。实际应用中，NTA因为多一个螯合位点使纯化过程中金属浸出最小，并与还原二硫键的20mM b-巯基乙醇相容。存在其它螯合或还原成分时，IDA树脂的高金属浸出率可能导致纯化结果不佳，但是IDA介质可以多次循环使用而不损失性能。实际应用中，往往要优化条件，以使某种介质系统纯化特定目标蛋白达到最佳效果，调整天然条件下洗涤和洗脱缓冲液的咪唑浓度，尽量减少非特异结合蛋白的共纯化是常见的方法。
His.Bind柱
His.Bind柱预装了1.25ml柱床体积的Ni2+结合His.Bind树脂。顶部和底部的玻璃纤维确保上样和走柱时缓冲液均匀流动和最小干扰。使用BugBuster和Benzonase?核酸酶制备细菌裂解物可获得较好效果。
His.Bind和His.Bind快速缓冲液试剂盒
His.Bind缓冲液试剂盒是一套经过测试和优化的缓冲液，用于IDA His.Bind树脂一步法纯化蛋白。包括的溶液可用于10根2.5ml柱的Ni2+结合、洗涤和洗脱。除了8X Ni2+结合缓冲液（树脂以Ni2+结合形式提供），His.Bind快速缓冲液试剂盒与His.Bind缓冲液试剂盒成分完全一样。
Ni-NTA缓冲液试剂盒
Ni-NTA缓冲液试剂盒提供的一套缓冲液优化用于在Ni-NTA His.Bind树脂上纯化His.Tag融合蛋白。这些磷酸缓冲液与His.Bind缓冲液试剂盒中的Tris溶液不同。用户可以参考操作指南，使用4X浓缩液进行结合、洗涤和洗脱操作。
BugBusterTM Ni-NTA His.Bind和His.Bind纯化试剂盒
BugBuster蛋白抽提试剂是从大肠杆菌有效抽提可溶性蛋白的即用型溶液（不需要机械破碎细菌）。BugBuster Ni-NTA His.Bind和His.Bind纯化试剂盒带有BugBuster试剂（方便制备可溶性细胞抽提物）以及His.Tag融合蛋白亲和纯化的相应树脂。两个试剂盒都包括Benzonase核酸酶，用于降低粘度并从蛋白制备物中去除核酸。BugBuster His.Bind纯化试剂盒还包括层析缓冲液。