表达猪源链球菌类M-MRP 融合蛋白基因工程菌的构建及免疫保护试验

摘要: 利用PCR 技术, 分别扩增马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi subsp.zooepidemicus ) ATCC35246 株类M szp 基因583~1063 位碱基和猪链球菌(S.suis)2 型HA9801 株mrp 基因298~827 位碱基的片段。通过在类M 基因片段的3! 端和mrp基因片段的5! 端引物添加共同的SacⅠ酶切位点, 利用T4 连接酶连接, 克隆至pET-32a(+)载体。将重组质粒转化大肠杆菌(Escherichia coli ) BL21, 经IPTG 诱导, 可获得分子量约为60 kD 的融合蛋白。通过MRP 和类M 蛋白的多克隆抗体进行ELISA 反应和免疫印迹分析表明: 表达的融合蛋白同时具有类M 蛋白和MRP 的抗原性。用组氨酸亲和层析柱纯化的重组融合蛋白, 和链球菌的全菌二联灭活疫苗分别免疫两组仔猪, 重组蛋白的免疫保护率达60"。