HCV 非结构蛋白质5A 基因全长和高免疫源区的表达及免疫活性检测

【摘要】目的 探讨 HCV 非结构蛋白质 5A（NS5A）基因全长和高免疫源区的表达并比较其检测灵敏度。方法 以含 HCV 全基因组的质粒 pBRtm/HCV-3011（1b型）为模板，采用 PCR 方法扩增出 NS5A 全长基因（以下用 NS5AL 代替）和高免疫源区基因（以下用 NS5AS 代替），与 pET-32a 载体相连接构建重组表达载体pETNS5AL和 pET-NS5AS，分别转化 E.coli Rosetta（DE3）pLysS 和 BL21（DE3） 感受态细胞，经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导后，蛋白质印迹法检测其表达，镍螯合（Ni2+-NTA）琼脂糖亲和层析柱纯化重组 NS5AL 和NS5AS 蛋白，最后通过ELISA 法检测重组蛋白的免疫活性并对其检测灵敏度进行比较。