分泌人肿瘤坏死因子α的基因工程细胞系的建立

【摘要】目的:建立稳定的基因工程细胞系。方法: 将含有人肿瘤坏死因子α( hTNFα)全长cDNA插入表达载体pSNAV2. 0,产生重组质粒pSNAV2. 0 - TNFα,利用阳离子脂质体介导将其转染到人HEK - 293细胞中,G418筛选阳性克隆hTNF /293,采用Western blot检测转染细胞上清中hTNF蛋白的表达。结果: 通过SalⅠ和EcoRⅠ双酶切、PCR 及测序鉴定证明:在质粒pSNAV2. 0中插入片段正确。采用RT - PCR和Western blot法检测表明HEK - 293细胞培养上清中有hTNFα蛋白表达,分子量为17KDa。结论: 成功构建重组质粒pSNAV2. 0 - TNFα,真核表达载体构建正确,转染HEK - 293细胞后可有效分泌hTNFα蛋白,并能分泌到细胞外。