色谱仪维修系列之选择高效液相色谱柱的技巧

　　一、聚合物填料

　　聚合物调料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸至等，其主要优点是在PG值为1-14均可使用。

　　相对与硅胶基质的C18填料，这类填料具有更强的淑水性;大孔的聚合物填料对蛋白质等样品的分离非常有效。

　　现在的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料，色谱柱柱效教低。

　　二、硅胶基质填料

　　1、正相色谱

　　正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica)，以及其他具有极性官能团，如胺基团(ZH2,APS)和氰基团(CN，CPS)的键合相填料。

　　由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他团的极性教强，因此，分离的次序是依据样品中的各组份的极性大小，即极性强落的组份最先被冲洗出色谱柱。

　　正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如：正乙烷(Hexane),氯(Chloroform) 二氯甲烷(Methylence Chloride)等.

　　2、反相色谱

　　反相色谱填料常是以硅胶为基础，表面键合有极性相对教弱的官能团的键合相。

　　反相色谱所使用的流动相极性教强，通常为水，缓冲液与甲醇，已腈等混合物。

　　样品流出色谱柱的顺序是极性教强组合最先被冲出，而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。

　　常用的反相填料有C18(ODS) C8(MOS)。C4(B)C6H5(Phenyl)等。

　　三、其他无机填料

　　其它HPLC的无机填料色谱柱也已经商品化。由于其特殊的性质，一般仅限于特殊的用途。如墨化碳也用于正逐渐成为反相色谱填料。这种填料的分离不同与硅胶基质烷基键合相，石墨化碳的表面即是保留的基础，不再需其它的表面改性，该柱填料一般比烷基键合硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强，石墨化碳可用于分离某些几何导构体，又由于HPLC流动相中不会被溶解，这类柱可在任何PH与温度下使用。氧化铝也可用于HPLC，氧化铝微粒刚性强，可制成稳定的色谱柱柱床，其优点是可在PH高达12的流动相中使用。但由于氧化铝与碱性化合物作用也很强，应用范围受到一定的限制，所以未能广泛应用，新型氧化诰填料也可用于 HPLC，商品化的仅有聚合物涂层的多孔氧化诰微球色谱柱，应用PH范围1~14，温度可达到1000C。由于氧化诰填料几年才开始研究，加之前的实验难度，其重要用途与优势尚在进行中。

　　四、怎样选择填料粒度

　　目前，商品化的色谱料粒度从1um到超过30um均有销售，而目前分析分离主要用3,5和10um填料，填料的粒度主要影响填充柱的两个参数，即柱效和背压。粒度越小，填充柱的柱效越高;小于3um的填料应用，在相同选择性条件下，提高柱效可提高分离度，但不是唯一的因素。如果固定相选择是真确，但是分离度不够，那么选择更小粒度的填料是很用有的，3um填料填充柱的柱数比相同条件下的5UM填料的柱效提高近30%;然而;3um的色相谱的背压却是5um的2倍。与此同时，柱效提高意味着在相同条件下可以选择更短的色谱柱，以缩短分析时间，另外，可以采用低粘度的溶剂做流动相或增加色谱柱的使用温度，比如用乙腈代替甲醇，以降低色谱柱的压力。

　　五、如何保证良好的柱性能与柱寿命

　　认证阅读色谱柱使用说明书

　　使用填充良好的色谱柱

　　尽量减少压力波动，避免机械及热冲击

　　使用保护柱及在线过滤器

　　经常以强溶剂冲洗色谱柱

　　充分过滤样品及流动相，尽量避免杂质微粒与保强留分成

　　用稳定的固定相(C18最稳定)