HPLC法测定桂丹莪棱口服液中丹酚酸B的含量

【摘要】目的  建立桂丹莪棱口服液的质量标准。方法  采用HPLC法对桂丹莪棱口服液中丹酚酸B的含量进行测定。结果  桂丹莪棱口服液中丹酚酸B的含量在0.0081-0.1628μg的范围内，有良好的线性关系，r=0.9999，平均回收率为99.08%，RSD为 1.27%。结论  建立了桂丹莪棱口服液的质量标准，该方法操作易行，稳定可靠，用于桂丹莪棱口服液中丹酚酸B的含量，可以用于该制剂的质量控制。
【关键词】桂丹莪棱口服液 丹酚酸B  HPLC  

【Abstract】 Objective: To establish a standard for determination of paeoniflorin in DanGuieleng  mixture. Method: Paeoniflorin in DanGuieleng  mixture by HPLC. Result: The linear range of paeoniflorin was 0.0081-0.1628μg, r=0.9999. The average recovery of paeoniflorin was 99.08%and RSD was 1.27%. Conclusion: The method is simple,sensitive and accurte and can be used to determine paeoniflorin in DanGuieleng  mixture and quality control of DanGuieleng  mixture.
【Key words】 DanGuieleng  mixture  paeoniflorinB  HPLC
        桂丹莪棱口服液是经批准生产的医院中药制剂+豫药制字Z04140016），处方由当归，桂枝，牡丹皮，茯苓，益母草，丹参，香附，莪术等十一味药组成，具有消炎止痛、活血化瘀，消癥瘕的功效。经过多年的临床应用证明其治疗慢 性盆腔炎，子宫内膜异位症，卵巢囊肿，子宫肌瘤，炎性包块等症功效显著。现行质量标准中只有薄层色谱鉴别，未收载含量测定项目，不能有效的控制药品质量。 丹参是其主药之一，其有效成分是丹酚酸B，因此，测定桂丹莪棱口服液制剂中丹酚酸B含量对控制桂丹莪棱口服液的质量有着十分积极的意义。所以为了进一步提 高标准，保证制剂的稳定可靠，我们采用高效液相法对制剂中的丹酚酸B进行了含量测定。
        1  仪器与试药
        Agilent1200高效液相色谱仪；色谱柱Agilent-C18（5μm，4.6mm×150mm），AUW220D电子天平，丹酚酸B对照品（批号：111562-200605，中国药品生物制品检定所），桂丹莪棱口服液为商丘市柘城县人民医院提供（批号为110411，110630，110726），缺位阴性对照样品由商丘市中医院提供。
        2  方法与结果
        2.1 色谱条件
        Agilent-C18色谱柱（150mm×4.6mm，5μm），流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（13:87），检测波长为286nm，柱温：25℃，流速为1.0ml·min-1，进样量10μl。
        2.2 对照品溶液的制备
        精密称取对照品丹酚酸B8.14mg，置100ml棕色量瓶中，加75%甲醇溶解至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml棕色量瓶中，加75%甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
        2.3 供试品溶液的制备[2]
        取供试品混匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加75%甲醇70ml，超声处理（功率240W，频率45kHz)30分钟，放冷，加75%甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm 微孔滤膜滤过,即得。
        2.4 阴性对照品溶液的制备
        除丹参外，其他各药按供试品处方量投料按桂丹莪棱口服液的制备工艺制成阴性对照品，然后按供试品的制备方法，制成阴性对照品溶液的制备。
        2.5 系统适应性试验
        取上述阴性对照溶液、对照品溶液、供试品溶液适量，注入高效液相色谱仪，记录色谱图(图1)。
        2.5.1 线性关系考察 
        分别吸取对照品溶液（0.158mg·ml-1）2.5、5、8、10、12、15μl各进样两次，记录峰面积分值，以丹酚酸B峰面积积分值对进样量进行 回归，得到回归曲线y=51.784x-29.176，r=0.9999。结果表明其线性关系良好，线性范围为：0.0081-0.1628μg 。 
         
        2.5.2 精密度试验
        精密吸取同一供试品溶液10μL ,重复进样6 次,按上述色谱条件测定峰面积。结果, RSD = 0.43% ,表明仪器精密度良好。
        2.5.3 重复性试验
        精密称取同一批(批号: 110630) 样品6 份，照“2.2”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样，测定。结果，平均含量为0.0617mg/ml，RSD=0.68% ，表明本方法重复性良好。
        2.5.4 稳定性试验
        取供试品溶液(批号: 110630)，分别于0、1、2、4、8 、12h 各精密吸取10μL,按上述色谱条件测定峰面积积分值。结果，RSD = 0.87%，表明供试品溶液在12h 内稳定。
2.5.5 加样回收率试验
        取已知含量的样品9份，精密量取3ml，置100ml量瓶中, 分别精密加入一定量的丹酚酸B对照品，照“2.3”项下方法制备供试品溶液,按上述色谱条件进样10μL，测定，计算回收率。结果详见表1 。
        表1 加样回收实验结果
         
        3 样品含量测定
        按上述含量测定方法测定样品中丹酚酸B含量。结果见表2。
        表2 桂丹莪棱口服液中丹酚酸B的测定结果 
         
        4 结论
        在供试品制备的的过程中，也曾考虑到其他样品对丹参提取以及含量测定的影响[3-4]，考察了用不同浓度的甲醇进行提取和处理方法，结果发现以75%甲醇和超声提取30分钟的效果最，考虑到操作的方便性，可操作性，本实验采取了75%甲醇超声提取。
        桂丹莪棱口服液是医院制 剂，在长期的临床实践中证明，就有良好的疗效，但是长期以来，以薄层鉴别作为该药的标准，没有具体的质量控制标准，葛根是桂丹莪棱口服液的主药之一，本实 验通过用HPLC法对桂丹莪棱口服液中丹酚酸B的含量进行测定。通过以上实验，建立了桂丹莪棱口服液制剂的质量控制方法，该方法稳定可靠，操作简便，专属 性较强，可以作为桂丹莪棱口服液制剂的质量控制标准的参考。
参 考 文 献 
[1] 河南省医疗机构制剂标准．豫药制字：Z04140014.
[2] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典(一部) [S]. 北京:化学工业出版社,2010 :70.
[3] 杨翠微，张俊伟.HPLC测定参苏丸中丹酚酸B的含量[J].湖南中医药导报，2000,6(16):36.
[4] 邵陆，李振志.HPLC法测定愈风宁心胶囊中丹酚酸B的含量[J].齐鲁药事.2001,(4):23.