食品中栀子黄的测定——分析步骤及计算方法

　　5 分析步骤

　　5.1 样品处理

　　5.1.1 饮料：将样品温热，搅拌除去二氧化碳或超声脱气，摇匀后，通过微孔滤膜0.4?m过滤，滤液备作HPLC分析用。

　　5.1.2 酒：样品通过微孔滤膜过滤，滤液备作HPLC分析用。

　　5.1.3 糕点：称取10g样品放入100mL的圆底烧瓶中，用50mL石油醚加热回流30min，置室温。砂芯漏斗过滤，用石油醚洗涤残渣5次，洗液并入滤液中，减压浓缩石油醚提取液，残渣放入通风橱至无石油醚味。用甲醇提取3～5次，每次30mL，直至提取液无栀子黄颜色，用砂芯漏斗过滤，滤液通过微孔滤膜过滤，滤液贮于冰箱备用。

　　5.2 测定

　　5.2.1 HPLC参考条件

　　色谱柱：粒度5?m ODS C18150mm×4.6mm

　　流动相：甲醇：水(35∶65)

　　流速：0.8mL/min

　　波长：240nm

　　5.2.2 标准曲线

　　在本实验条件下，分别注入栀子甙标准使用液0，2，4，6，8?L，进行HPLC分析，然后以峰高对栀子甙浓度作标准曲线。

　　5.2.3 样品测定

　　在实验条件下，注入5?L“5.1”项下的样品处理液，进行HPLC分析，取其峰与标准比较，测得样品中栀子甙含量。

　　6 结果

　　6.1 计算

　　按式(1)计算。

　　式中：X——样品中栀子黄色素的含量，g/Kg;

　　A——进样液中栀子甙的含量，?g;

　　V——样品制备液体积，mL;

　　m一一样品质量，g。

　　6.2 本标准的检测限、回收率、精密度。 本方法栀子甙的检测限为3.2?g/mL，栀子黄色素浓度在0.2～0.3g/kg范围内，饮料、酒、蛋糕回收率分别为94.1%，92%，91.3%。相对标准差(R.S.D)%：2.69，4.70，3.20。

　　第二法 薄层色谱法

　　1 原理

　　样品中栀子黄色素用有机溶剂提取，并经过纯化处理，去除干扰物质，浓缩点样展开后，在UV254nm灯下呈黑色斑点，与标准比较进行定性，及概略定量。

　　2 试剂

　　所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。

　　2.1 甲醇。

　　2.2 乙醇。

　　2.3 乙酸乙酯。

　　2.4 丙酮。

　　2.5 甲酸。

　　2.6 三氯甲烷。

　　2.7 硅胶GF254：薄层色谱用。

　　2.8 展开剂：乙酸乙酯：丙酮：甲醇：水(5∶5∶1∶1)。

　　2.9 展开剂：三氯甲烷：甲醇(6∶3)。

　　3 仪器

　　3.1 全玻璃浓缩器。

　　3.2 薄层板涂布器。

　　3.3 玻璃板，4cm×20cm，20cm×20cm。

　　3.4 层析缸。

　　3.5 UV254 nm荧光灯。

　　3.6 微量注射器。