DNA芯片的类型和制作
上一篇 /
下一篇 2012-05-01 16:42:05
DNA芯片的类型和制作
迄今为止,绝大多数的生物芯片都是DNA芯片,所以制作芯片的方法也多是为DNA芯片设计的。目前的DNA芯片有两类。
①片上就位合成寡核苷酸点阵芯片(ONA)。
②用微量点样技术制作cDNA点阵芯片(CDA)。
虽然ONA可以按常规方法先合成寡核苷酸,再点加于阵列的方法来制作,但应用就位合成法已证明是更成功的途径。这一技术中采用了多项先进的工艺,例如:
1、利用组合化学的原理安排各寡核苷酸的位点,使制成的芯片在反应后较容易地寻址。
2、用表面化学的方法处理及衍生化基片(玻璃片、硅片或尼龙片)表面,使核苷酸能固定在其上,并耐受合成循环中某些试剂的侵蚀。
3、用光导向平版印刷技术,使芯片表面可用屏蔽物选择性地使不同位点受光照脱保护,从而可定点合成寡核苷酸中的各个碱基。
最后还应用了自动核酸合成的方法,经过脱保护、活化、偶联、戴帽和氧化等步骤逐个地联结上各个核苷酸。与玻片连接的是核苷酸的3’端。
用就位合成法已可以从最初的100个位点合成八核苷酸到目前的在1.6平方厘米上的40万个点合成20个核苷酸阵列。看来要将人类基因组3×10[sup]9[/sup]个碱基全部集成于一块芯片上的理想是可以实现的。
在另一方面机械微点样技术制作CDA芯片则主要归功于物理学的成就。精密机械手将带有多个滴加头的点样装置,从96孔
或384孔板上将cDNA克隆迅速面定量地接触滴加至已衍生处理的基片上,每点1nl,用此法接上的核酸长度可为500一5000个核
苷酸。所以杂交错配的可能性,也就是选样性,有较大改善,可以逐句破译序列密码而不是逐字阅读序列。另外点加法的优点是可以制作各种生物芯片,不局限于制作DNA芯片。目前已有制作免疫芯片的报道。当然也可适用于受体——药物,凝集素一多糖等更广泛的领域。
机械滴加法的另一种方式是喷墨点加法。在此法中进行滴加的样品吸入微型喷嘴,喷嘴由压电晶体驱动,压缩喷嘴定量地将样品喷点于玻片上。
机械点样法可以制成每平方米含10000个点的阵列芯片,每天可制成100片左右。
导入论坛收藏
分享给好友
推荐到圈子
管理
举报
TAG: dna芯片