可内化的人源抗Met 基因工程抗体Fab 的亲和力成熟与特性分析

摘要：应用噬菌体展示技术制备抗Met (HGF 受体，一个与肿瘤发生、侵袭和转移相关原癌基因产物)特异性、高亲和力的全人Fab 片段. Fab 基因分三步合成，以从错配PCR 突变库中筛选出的Fab 基因可变区为模板，扩增VH 和VL 基因，分别与CH1、CL 基因融合，合成Fd 和L 基因，再拼接合成Fab 基因，克隆于pComb3XSS 中，构建Fab 次级抗体库. 经细胞筛选和固相筛选，获得高亲和力阳性克隆. 工程菌经IPTG 诱导表达，SDS-PAGE 和蛋白质印迹分析，在25 ku 和27 ku 出现预期大小蛋白质条带. Fab 分子经流式细胞术、免疫沉淀、细胞免疫荧光检测，结果表明，Fab 能够与S114 和MKN45 细胞膜上的Met 胞外区特异性结合，而与阴性细胞NIH3T3 不结合. 抗体内化分析显示，Fab 能够与标记肥皂草毒素(ZAP)的抗人IgG结合，并进入细胞内，抑制Met 阳性细胞的生长，揭示该抗体能够与Met 特异性结合，并且被细胞内化. 该抗体有望成为肿瘤临床诊断或治疗的候选分子.