利用his2tag 纯化和复性基因工程产物肠激酶

摘　要: 构建了融合表达肠激酶轻链( EKLC) 的基因工程大肠杆菌,将该菌于37 ℃在含30 mg/ L卡那霉素的LB 培养基中培养,当细胞密度(OD600 ) 达到015～016 时加入最终浓度为014 mmol/ L的IPTG并降温至26 ℃进行诱导表达,4 h 后目的蛋白质的表达量可达菌体总蛋白质的40 %以上,但所表达的重组产物大多以包涵体形式存在于菌体中。利用产物N 端携带6 个组氨酸标签与金属螯合层析介质中镍离子的亲和性,应用镍离子金属螯和层析对样品包涵体进行了纯化和复性研究。实验结果表明,在变性条件下纯化的样品在柱上不经洗脱,直接用复性液洗涤6 h ,可以使EKLC 在得到提纯的同时实现复性,得到了电泳纯度为96 %的具有生物活性的EKLC ,最高活性为712 U 。