感受态细胞的制备方法及详细步骤

　　感受态细胞是做连接转化必用的，现在对其制备方法做一下详细的说明，供大家参考：

　　1、首先将保存的细菌或酵母等，需要做感受态的细胞从-20℃取出，取20ul菌液，加入到2ml的LB培养基中，37℃摇菌过夜，将其复苏。

　　2、从复苏的细菌或酵母菌中取20ul菌液加入到2ml的LB培养基中，37℃，260rpm摇菌3h。

　　3、冰上放置10min

　　4、4℃5000rpm离心5min，弃掉LB培养液，倒置在消毒的滤纸上1min，空干水

　　5、加入200ul(十分之一体积)预冷的0.1mol/L的氯化钙重悬

　　6、冰浴放置10min

　　7、4℃5000rpm离心5min，弃掉LB培养液，倒置在消毒的滤纸上1min，空干水

　　8、加入100ul(二十分之一体积)预冷的0.1mol/L的氯化钙溶液重悬

　　9、4℃放置在冰箱中，12-24h之内转化，注意一定不要少于12h或者多于24h，大约在16h效果最佳。

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