人淋巴细胞- NT3 基因工程细胞的建立及鉴定

【摘要】　目的　建立能够存活较长时间并稳定表达神经营养素- 3 (neurotrophin - 3 ,NT3) 的人淋巴细胞株,为后续的动物和人体耳蜗内基因转染实验奠定基础。方法　从正常人全血中通过Ficoll 液提取人淋巴细胞,并在其完全血清培养基中加入白细胞介素- 2 ( IL - 2) 使其良好生长。通过RT - PCR 得到人胎肝组织的NT3cDNA ,以T4DNA 连接酶和真核表达载体pIRES - DsRed2 相连接。以阳离子脂质体作为载体,将pIRES - DsRed2 - NT3 转染人淋巴细胞,进行RT- PCR 及Western Blot 分析鉴定。结果　建立了一种能使体外培养淋巴细胞成活时间延长的新方法,成功转染NT3 基因至淋巴细胞中,并能继续存活相对较长时间,Western Blot 证明细胞上清液中有NT3 ,构建了稳定表达NT3 的人基因工程淋巴细胞。结论　构建重组质粒pIRES - DsRed2 - NT3 ,利用淋巴细胞作为中介宿主,进而表达、分泌NT3 ,为进一步NT3 基因转染致聋动物耳蜗实验奠定了基础,并有可能为人体基因转染治疗耳聋找到很好的中介细胞。