【摘要】 为了有效地预防和根除山羊痘,研制能够区分
自然感染和
疫苗免疫的
标记疫苗。本研究在山羊痘
病毒(goat pox virus , GPV) 疫苗株AV41 胸苷激酶(thymidinekinase ,TK)
基因克隆、鉴定的基础上,构建转移载体。将痘苗病毒(Vaccinia Virus , VV) 晚期启动子P11 和大肠杆菌β2半乳糖苷酶基因( LacZ) 报告基因片段插入含有TK片段同源臂的载体pTK的Kpn I 酶切位点,经酶切、PCR 鉴定出,命名为pTK2LacZ。用脂质体法转染感染了GPV AV41 株的犊牛睾丸(bovine testes ,BT)
细胞,待出现80 %以上的细胞病变时收获病毒,经过连续9 代蓝色蚀斑筛选、纯化和PCR 鉴定,获得纯化的表达LacZ基因、TK功能缺失的重组病毒,命名为rGPV2LacZ。
生物学特性研究显示,LacZ 基因的插入不影响重组病毒的增殖特性,其毒力、生长特性与亲本株相似,保持原有疫苗株的生长特性,而且在BT细胞和羔羊睾丸(lamb testes , LT) 细胞连续传20 代遗传性状很稳定。本研究筛选、纯化的重组病毒rGPV2LacZ可以区分自然感染和疫苗免疫动物,为进一步研制山羊痘病毒基因工程标记疫苗奠定了基础。