采用蛋白质组学技术筛选鼻咽癌细胞的甲基化沉默基因

摘要 为筛选鼻咽癌的甲基化沉默基因，采用二维凝胶电泳(2-DE)技术分离甲基转移酶抑制剂5- 杂氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-2-dC)处理与未处理鼻咽癌细胞5-8F 的蛋白质，PDquest 图像分析软件识别差异蛋白质点，基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定差异蛋白质. 然后采用Western blotting 和RT-PCR 检测差异蛋白质nm23-H1 在药物处理与未处理5-8F 细胞中的表达水平，采用甲基化特异性PCR(MS-PCR)检测nm23-H1 基因在药物处理与未处理5-8F 细胞中的甲基化水平. 建立了5-aza-2-dC 处理与未处理5-8F 细胞蛋白质的2-DE 图谱，识别了49 个差异表达的蛋白质点，鉴定了33 个差异表达的蛋白质，其中包括nm23-H1 在内的15 个蛋白质在5-aza-2-dC 处理后的5-8F 细胞中表达上调，而18 个蛋白质表达下调. Western blotting 和RT-PCR 结果显示，nm23-H1 在5-aza-2-dC 处理5-8F 细胞后表达上调，MS-PCR 结果显示，在5-aza-2-dC 处理5-8F 细胞后nm23-H1 基因甲基化水平下降，结果证实，nm23-H1 基因是5-8F 细胞中的甲基化沉默基因. 15个5-aza-2-dC 处理后表达上调的基因可能是5-8F 细胞中的甲基化沉默基因，为筛选鼻咽癌甲基化失活基因提供了科学依据.