幽门螺杆菌hpaA 基因工程菌蛋白表达条件优化、纯化及其活性鉴定

摘要　目的:优化幽门螺杆菌hpaA 基因工程菌(pMAL2c2X2hpaA2TB1) 的表达条件,并对其表达产物进行纯化和免疫活性鉴定。方法:通过诱导表达实验了解不同诱导时机、诱导剂浓度、诱导时间对蛋白表达量的影响, 并应用SDS2PA GE 方法对表达产物进行分析;Amyloss 树脂预装柱对可溶性HpaA 蛋白进行分离、纯化;对纯化后蛋白做Western blot 实验鉴定免疫活性。结果:该工程菌培养2 h 时加入异丙基2β2D 硫代半乳糖苷( IPTG) 终浓度为013 mmol/ L 进行诱导4 h ,目的蛋白表达量达到菌体总蛋白的30 %以上;经纯化得到了较高纯度( > 90 %) 的目的蛋白,并具有良好的免疫活性。结论:建立了从TB1 (pMAL2c2X2hpaA) 可溶性表达产物中纯化高纯度rHpaA 融合蛋白的方法,为进一步的动物实验和诊断性抗原的研制以及工程菌发酵、高效表达生产工艺的研究打下了基础。