蛋白质的测定----常量凯氏定氮法与自动定氮分析法
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下一篇 2012-06-16 12:36:02
内容摘要:待凯氏烧瓶内液体减少至约1/3时,将冷凝管下端提出液面,再蒸馏数分钟,用少量水冲洗冷凝管下端后停止蒸馏。取下接收瓶,用盐酸标准溶液滴定至终点。同时做空白试验(除不加样品外,取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、硫酸,按同一方法做)。
常量凯氏定氮法
本法适用于各类食品中蛋白质的测定。
1.原理
同微量凯氏定氮法。
2.仪器
3.试剂
①CuSO~。
②K2S04。
③浓HzS04。
④饱和硼酸溶液。
⑤混合指示剂:1份0.1%甲基红乙醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。也可用2份0.1
9/6甲基红乙醇溶液与1份0。1%次甲基蓝乙醇溶液I临用时}昆合。
⑥50%氢氧化钠溶液。④0-1 tool‘L叫HCl标准溶液(需用无水碳酸钠标定后使用)。
4·操作步骤
准确称取1~3 g样品,小心地放人750 mL凯氏烧瓶中,加入10 g无水硫酸钾,0.5 g硫酸铜和25
mL浓硫酸,于凯氏瓶口放一小漏斗,并将其以45。角斜支于有小孔的石棉网上。在通风柜中用电炉以小火加热,待内容物全部炭化,泡沫停止产生后,加大火力,保持瓶内液体微沸,至液体变蓝绿色透明后再继续加热微沸30
min,冷却。冷却后连接好蒸馏装置,将冷凝管下端插入接受瓶的液面之下(瓶内预先加入60 mL饱和硼酸溶液及2~3滴混合指示剂)。在凯氏烧瓶中加入50~100
mL蒸馏水,玻璃珠数粒,通过安全漏斗加入60~80 mL
50%氢氧化钠溶液,至溶液呈蓝黑任.为将蒸馏吸收装置连接好,加热蒸馏。待凯氏烧瓶内液体减少至约1/3时,将冷凝管下端提出液面,再蒸馏数分钟,用少量水冲洗冷凝管下端后停止蒸馏。取下接收瓶,用盐酸标准溶液滴定至终点。同时做空白试验(除不加样品外,取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、硫酸,按同一方法做)。
5.计算
自动定氮分析法
1.原理
同微量凯氏定氮法。
2.仪器
①自动凯氏定氮仪:该装置内有自动加碱蒸馏装置,自动吸收和滴定装置及自动数字显示装置。
②消化装置:含有凯氏消化瓶和红外线加热装置。
3.试剂
本实验所用试剂皆为分析纯,所用水皆为蒸馏水。
①浓硫酸。
②凯氏片(催化剂)KzS04+Se。
③40%氢氧化钠溶液。
④无水硫酸钠。
⑤1 9/5硼酸(H。BO。)吸收液:称取100 g硼酸溶于10L水中。加入100 mI.溴钾酚绿溶浓,再加人70 ml。甲基红溶液,最后加入3 mL
4 9/6氢氧化钠溶液。
⑥O.1 mol·I。叫盐酸标准溶液,标定后使用。
4.操作步骤
①样品消化:称取一定量(O.5~1.0 g)的样品于消化管中(半固体样品用称量纸称取),加一粒凯氏片于消化管中,然后加入5
mL,浓硫酸,放置过夜,同时做样品空白管。在消化过程中,先低温消化(防止高温消化时样品溢出),低温消化1
h后,将温度升到最高挡,至消化液无色透明。待消化液冷却后,加入少量水冲洗消化管内壁,振摇,以免内壁黏有样品以致消化不完全。然后于消化炉上再消化,直至液体无色透明。放置室温后,加水至25
mI。,待测。
②样品定氮:开启自动凯氏定氮仪电源,输入测定时的参数,打开相应按钮,产生蒸汽5
min,将消化管装入,关闭安全门,开始自动定氮。当结束灯亮时,记录滴定结果。打开安全门,进行下一个样品测定。
5.计算
6.注意事项
①使用自动定氮仪时,定氮前,应将管路中的吸收液排出去。
②本仪器消耗盐酸标准溶液的用量最佳范围在O.5~7 mI。。
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