蛋白质的测定----常量凯氏定氮法与自动定氮分析法

上一篇 / 下一篇  2012-06-16 12:36:02

  内容摘要:待凯氏烧瓶内液体减少至约1/3时,将冷凝管下端提出液面,再蒸馏数分钟,用少量水冲洗冷凝管下端后停止蒸馏。取下接收瓶,用盐酸标准溶液滴定至终点。同时做空白试验(除不加样品外,取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、硫酸,按同一方法做)。

  常量凯氏定氮法

  本法适用于各类食品蛋白质测定

  1.原理

  同微量凯氏定氮法。

  2.仪器

  3.试剂

  ①CuSO~。

  ②K2S04。

  ③浓HzS04。

  ④饱和硼酸溶液。

  ⑤混合指示剂:1份0.1%甲基红乙醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。也可用2份0.1 9/6甲基红乙醇溶液与1份0。1%次甲基蓝乙醇溶液I临用时}昆合。

  ⑥50%氢氧化钠溶液。④0-1 tool‘L叫HCl标准溶液(需用无水碳酸钠标定后使用)。

  4·操作步骤

  准确称取1~3 g样品,小心地放人750 mL凯氏烧瓶中,加入10 g无水硫酸钾,0.5 g硫酸铜和25 mL浓硫酸,于凯氏瓶口放一小漏斗,并将其以45。角斜支于有小孔的石棉网上。在通风柜中用电炉以小火加热,待内容物全部炭化,泡沫停止产生后,加大火力,保持瓶内液体微沸,至液体变蓝绿色透明后再继续加热微沸30 min,冷却。冷却后连接好蒸馏装置,将冷凝管下端插入接受瓶的液面之下(瓶内预先加入60 mL饱和硼酸溶液及2~3滴混合指示剂)。在凯氏烧瓶中加入50~100 mL蒸馏水,玻璃珠数粒,通过安全漏斗加入60~80 mL 50%氢氧化钠溶液,至溶液呈蓝黑任.为将蒸馏吸收装置连接好,加热蒸馏。待凯氏烧瓶内液体减少至约1/3时,将冷凝管下端提出液面,再蒸馏数分钟,用少量水冲洗冷凝管下端后停止蒸馏。取下接收瓶,用盐酸标准溶液滴定至终点。同时做空白试验(除不加样品外,取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、硫酸,按同一方法做)。

  5.计算

  自动定氮分析

  1.原理

  同微量凯氏定氮法。

  2.仪器

  ①自动凯氏定氮仪:该装置内有自动加碱蒸馏装置,自动吸收和滴定装置及自动数字显示装置。

  ②消化装置:含有凯氏消化瓶和红外线加热装置。

  3.试剂

  本实验所用试剂皆为分析纯,所用水皆为蒸馏水。

  ①浓硫酸。

  ②凯氏片(催化剂)KzS04+Se。

  ③40%氢氧化钠溶液。

  ④无水硫酸钠。

  ⑤1 9/5硼酸(H。BO。)吸收液:称取100 g硼酸溶于10L水中。加入100 mI.溴钾酚绿溶浓,再加人70 ml。甲基红溶液,最后加入3 mL 4 9/6氢氧化钠溶液。

  ⑥O.1 mol·I。叫盐酸标准溶液,标定后使用。

  4.操作步骤

  ①样品消化:称取一定量(O.5~1.0 g)的样品于消化管中(半固体样品用称量纸称取),加一粒凯氏片于消化管中,然后加入5 mL,浓硫酸,放置过夜,同时做样品空白管。在消化过程中,先低温消化(防止高温消化时样品溢出),低温消化1 h后,将温度升到最高挡,至消化液无色透明。待消化液冷却后,加入少量水冲洗消化管内壁,振摇,以免内壁黏有样品以致消化不完全。然后于消化炉上再消化,直至液体无色透明。放置室温后,加水至25 mI。,待测。

  ②样品定氮:开启自动凯氏定氮仪电源,输入测定时的参数,打开相应按钮,产生蒸汽5 min,将消化管装入,关闭安全门,开始自动定氮。当结束灯亮时,记录滴定结果。打开安全门,进行下一个样品测定。

  5.计算

  6.注意事项

  ①使用自动定氮仪时,定氮前,应将管路中的吸收液排出去。

  ②本仪器消耗盐酸标准溶液的用量最佳范围在O.5~7 mI。。


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  • 更新时间: 2012-08-13

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