HPLC在生物药物分析上的应用

HPLC又称高效液相色谱法，是目前生物药物分析中应用广泛、发展迅速的一种分析方法，始于20世纪60年代中后期,它是在经典液相柱色谱的基础上,引入气相色谱的理论和技术,应用于液相柱色谱系统的设计，并加以改进而发展起来的一种重要分离分析方法，同时机械、光学和电子等技术上的进步,也促使了HPLC的发展。

从早期药物发现到药物临床试验乃至上市后评价，生物分析和药物代谢研究在药物研发全过程中发挥着重要作用，生物分析和药物代谢的研究和应用已密不可分。美迪西在中国CRO公司排名中比较靠前，其生物分析服务部门拥有专业的科研团队，分析实验室配置先进的仪器设备，实行全面的信息化管理，实验研究符合FDA/CFDA GLP标准要求，服务内容涉及药代动力学、药效学、免疫原性和生物等效性等研究方面，为客户提供小分子药物、生物制剂、疫苗和生物标记物的筛选与开发，以及临床前和临床研究。

HPLC是生物药物分析常采用的一项技术，它采用了高压输液泵，高效固定相和高灵敏度在线检测器等技术，具有分离效能高、分析速度快、灵敏度高、色柱可以反复使用、流动相可选择范围宽、流出组容易收集、适用范围广和安全等优点。它特别适合挥发性低、热稳定性差、分子量大的高分子化合物以及离子型化合物的分离分析测试，广泛应用于医学、药学、化学、生化、工业、农业、环保、商检和法检等科学领域，各大学、研究所和工厂的试验室中,它已作为一种常备仪器使用。

    近年来，高效液相色谱法在生物药物分析中发挥着越来越重要的作用，主要是鉴别相关物质、检查药物中有关物质的含量限度以及测定有效成分或主要成分含量。HPLC具有高压、高速、高效、高灵敏度等特点，在目前生物药物的鉴别、检查和含量分析中占有重要地位。例如在HPLC法中，保留时间与组分的结构和性质有关，是定性的参数，可用于药物的鉴别。用高效液相色谱法测定含量可以消除药物中的杂质、制剂中的附加剂及共存的药物对测定的干扰，因此药物成分含量测定中HPLC法应用广泛。

    随着衍生化技术的发展，改善了被测物的检测特性，提高检测灵敏度，使HPLC已广泛用于氨基酸的分析。HPLC在生物化学和生物工程中的应用包括氨基酸、多肽合成和蛋白质的分析研究；核碱、核苷、核苷酸和核酸的分析研究；生物胺的分析研究（儿茶酚胺类)等。  

    HPLC也是蛋白质结构和纯度分析的重要工具，英国药典和美国药典对胰岛素的鉴别和效价测定及其中相关蛋白的限量测定均采用HPLC方法，我国药典中HPLC仅用于鉴别；对于嘌呤类药物甲氨喋呤与叶酸以及糖类药物美国也多已应用HPLC进行含量分析。

    近年来由于检测器的发展，如蒸发光散射检测器的应用拓展了对无近紫外吸收的药物的分析，二极管阵列检测器、荧光检测器的应用提供了一种快速有效的高灵敏度的方法。HPLC采用蒸发光散射检测器直接检测非衍生化的氨基酸，配合HPLC的分离定量，检测限达到了ng 级，回收率为94％。液相色谱与质谱的联用在生物大分子、体内药物代谢和临床药物检测中应用日益增多，多维色谱LC-LC-MS,LC-LC-LC-LC-MS-MS等用于药物、蛋白质、多肽结构测定，并使整个操作完全自动化，是21世纪色谱分析的发展方向之一。微柱液相色谱由于分析所学的样品用量及流动相的消耗大大下降，检测灵敏度大幅度提高，具有广阔的发展前景。

高效液相色谱法除了在生物药物分析上应用以外，还可以用于食品、药品、保健品的检测上来。近年来，食品、药品、保健品以及动物饲料等各方面频频出现非法添加违禁药物的事件，这类成分往往对患者造成病情不受控制、药物中毒等不良反应，严重者甚至威胁到患者生命。高效液相色谱法对添加违禁药物的日常检验工作提供了有力的技术支持。