蛋白质巯基亚硝基化对RSC - 364细胞cAMP反应元件结合蛋白活性的影响

[摘　要] 　目的: 观察RSC - 364细胞外源性亚硝基化对cAMP反应元件结合蛋白(CREB)活性的影响。方法:提取RSC - 364细胞总蛋白,与100μmol/L 还原型谷胱甘肽( GSH) 、100 μmol /L NO供体亚硝基化谷胱甘肽(GSNO) 、10 mmol/L亚硝基化抑制剂二硫苏糖醇(DTT)及溶剂单独或联合应用孵育15 min完成外源性亚硝基化,采用生物素转化法与Western blotting技术检测亚硝基化蛋白表达水平;分别用溶剂或重组大鼠白细胞介素- 1β( rIL - 1β) 10μg/L孵育RSC - 364细胞1 h,提取细胞核蛋白,经外源性亚硝基化后用电泳迁移率改变分析( elec2trophoresismobility shift assay, EMSA)观察亚硝基化作用对CREB活性的影响。